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# 生物学# 合成生物学

植物遺伝子工学の進展

新しい方法で植物の改良がスムーズになって、より良い作物が作れるようになった。

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植物の改良をスムーズにする植物の改良をスムーズにするるよ。新しい方法が遺伝子工学のプロセスを早めて
目次

植物バイオテクノロジーと合成生物学は、作物を改善することを目指す重要な分野なんだ。植物が病気と戦ったり、害虫に耐えたり、栄養価を高めたり、収穫量を増やすことができるようにするのが焦点だよ。そのために、科学者たちは無数の微細な遺伝子材料を迅速かつ手頃な方法でテストする必要があるんだけど、植物と一緒に作業するのは、細菌みたいなシンプルな生物と比べるともっと複雑なんだ。

植物遺伝子工学の課題

植物を修正するための方法はいくつもあって、細菌を使ったり、粒子爆撃をしたり、他の技術を使ったりするんだ。一般的な方法の一つはアグロインフィルトレーションって呼ばれるもので、特定の細菌を使って植物の葉に新しい遺伝子を導入するんだ。この方法は、ニコチアナ・ベンテマニアっていう植物の葉に適用されることが多いんだけど、これらの方法は便利だけど欠点もあるんだ。例えば、遅かったり、高価な機器が必要だったりするんだ。

安定した遺伝子組み換え植物を作るのには長い時間がかかるし、これらの植物を育てるための施設も高くつくんだ。だから、科学者たちはアイデアをテストするために、もっと早くて安い方法が必要なんだ。

自動化の必要性

植物をテストして修正するプロセスをもっと迅速にするために、科学者たちは各ステップの自動化と最適化を考えているよ。細菌を使って植物を変換する方法はいくつもあるけど、細菌自体の変換方法の改善にはあまり注目されてこなかったんだ。最も一般的な方法、エレクトロポレーションはうまくいくけど、高価で大規模な実験でスケールアップするのが難しいんだ。他の方法、化学変換は安くて効果的じゃない。

モデル生物としてのマーチャンティア・ポリモルファ

研究者たちは、マーチャンティア・ポリモルファっていうシンプルな植物を研究に使い始めているよ。この植物は、より小さくて理解しやすいゲノムを持っていて、研究者たちのコミュニティも成長しているんだ。再生能力や成長サイクルが早いなどのユニークな特徴があるから、より複雑な花を持つ植物よりも遺伝子組み換え植物を作るのに適してるんだ。

マーチャンティアの変換

マーチャンティアの遺伝子を変えるために、科学者たちは粒子爆撃や細菌を使った変換法を使うことができるよ。細菌を使うのが一番簡単で効果的な方法なんだ。マーチャンティアの異なる部位、たとえば胞子や成体植物を変換に使うことができる。特に、胞子は一つの胞子から多くの変換された植物が生まれるから便利なんだ。

マーチャンティアの変換プロセスを簡素化することに成功した部分もあるけど、さまざまな方法を効果的に比較するためにはまだもっと作業が必要だね。

細菌変換の最適化

植物改良に使う細菌の変換を早めるために、研究者たちは以前の技術に基づいたシンプルな方法を開発したよ。大量の細菌やDNAを使うのではなく、もっと小さい体積を使うことで、プロセスを安く簡単にしているんだ。有用なDNAを取り込むことができる細菌であるコンピテントセルは、迅速かつ効率的に準備されるよ。

変換ステップでは、少量のDNAをコンピテントセルに加えて、その混合物を短時間凍結するんだ。その後、細胞はヒートショックを受けて、回復して成長することができる。この方法によって、細菌の変換成功率が高まり、植物改良に必要な素材を生成しやすくなったんだ。

細菌変換プロセスの自動化

細菌の変換をさらに簡素化するために、研究者たちはロボットシステムを使ってプロセスの一部を自動化したよ。これによって、変換がより早く安くなり、人為的なエラーを減らすことができる。ロボットはサンプルの準備や変換を最小限の監視でできるんだ。

この自動化は重要で、研究者が一度に多くのサンプルを扱えるようにして、大規模な実験がやりやすくなった。植物変換における異なる細菌株の効果をテストすることも、この方法で容易になったんだ。

マーチャンティアの胞子生成

細菌を変換した後の次のステップは、それをマーチャンティアの変換に使うことだよ。マーチャンティアの胞子は長期間保存できて、無菌条件で扱いやすいんだ。胞子が準備できたら、細菌を使ってミニチュア化された方法で変換できる。この方法では汚染リスクを減らせるんだ。

研究者たちは、さまざまな栄養溶液を使用して最良の発芽率を得るために色々試してみたよ。特定のシンプルな培地を使うとより良い結果が得られることが分かったし、胞子が塊にならないように多肉植物は培地に含めない方がいいんだ。

共培養と遺伝子組み換え系統の選択

胞子が発芽したら、変換された細菌と混ぜて遺伝子移転を行うよ。数日間の共培養の後、胞子を集めて抗生物質を含む成長媒体に入れて、不要な細菌を排除するんだ。この第二ステップは、望ましい遺伝子組み換え植物だけが生き残るようにするために重要なんだ。

このプロセスを洗練することで、科学者たちは毎週たくさんの変換植物を安定して生産できるようになるよ。個々の植物をより大きな皿に移すことを推奨して、成長を促して、さらなるテストに向けて最良の植物を選びやすくしているんだ。

ジェマ生成の成長条件の最適化

ジェマはマーチャンティアで植物の繁殖を助ける特別な構造なんだ。ジェマの生成を促すために、研究者たちはさまざまな栄養溶液をテストしているよ。少量のスクロースを加えることで、ジェマの生成が大幅に向上することが分かった。

成長条件を確立した後は、多くの植物を特定の特性のためにスクリーニングできるようになる。このようにして大量の植物をすばやく生成できる能力は、さまざまな遺伝学的研究の扉を開くんだ。

結論

細菌とマーチャンティアの変換の最適化における進展は、植物における遺伝子工学のプロセスを効率化したよ。時間とコストを削減することで、研究者たちは短期間でより多くの実験を行えるようになったんだ。この発展は、植物バイオテクノロジーや合成生物学の改善に特に重要なんだ。

この新しいパイプラインによって、科学者たちは遺伝子のアイデアから安定した遺伝子組み換え植物に数週間で移行できるんだ。迅速に多様な植物を生成できる能力は、新しいアイデアのテストをより良くすることができ、より良い作物や農業技術の改善につながるかもしれないね。

全体として、この取り組みは植物バイオテクノロジーの研究を加速させ、新しい農業技術やバイオテクノロジーの応用の道を切り開く大きな可能性を示しているんだ。自動化がもっと身近になるにつれて、小さな研究室でも高スループットの実験ができるようになって、高価な機器がなくても済むようになるかもしれないね。

オリジナルソース

タイトル: Semi-automated workflow for high-throughput Agrobacterium-mediated plant transformation

概要: High-throughput experiments in plants are hindered by long generation times and high costs. To address these challenges, we present an optimized pipeline for Agrobacterium tumefaciens transformation and simplified a protocol to obtain stable transgenic lines of the model liverwort Marchantia polymorpha, paving the way for efficient high-throughput experiments for plant synthetic biology and other applications. Our protocol involves freeze-thaw Agrobacterium transformation method in 6-well plates that can be adapted to robotic automation. Using the Opentrons open-source platform, we implemented a semi-automated protocol showing similar efficiency compared to manual manipulation. Additionally, we have streamlined and simplified the process of stable transformation and selection of M. polymorpha, reducing cost, time, and manual labour without compromising transformation efficiency. The addition of sucrose in the selection media significantly enhances the production of gemmae, accelerating the generation of isogenic plants. We believe these protocols have the potential to facilitate high-throughput screenings in diverse plant species and represent a significant step towards the full automation of plant transformation pipelines. This approach allows testing [~]100 constructs per month, using conventional plant tissue culture facilities. We recently demonstrated the successful implementation of this protocol for screening hundreds of fluorescent reporters in Marchantia gemmae.

著者: Jim Haseloff, D. Annese, F. Romani, C. Grandellis, L. Ives, E. Frangedakis, F. X. Buson, J. C. Molloy

最終更新: 2024-10-10 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.09.617252

ソースPDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.09.617252.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた biorxiv に感謝します。

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