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ARTIC-AmpプロトコルでCOVID-19の検出を向上させる

新しいARTIC-Amp法が、低ウイルス量サンプルでのウイルス検出を強化する。

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ARTIC-Amp:ARTIC-Amp:次世代のCOVID検出が向上したよ。新しいプロトコルで低ウイルス量の検出精度
目次

COVID-19のパンデミックは2019年12月に始まり、以来、世界中で何百万もの感染者と死亡者を出してきた。COVID-19の原因となるウイルスはSARS-CoV-2として知られていて、呼吸器系に影響を与えるコロナウイルスの一種なんだ。このウイルスは、生存と繁殖に必要な複数のタンパク質を生成するための遺伝物質を含んでいる。

ウイルスの働き

ウイルスが人間の細胞に入ると、自分自身を複製するために遺伝物質を使う。このプロセスにはいくつかのタンパク質が関与していて、その中の一つはウイルスのRNAをコピーするのを助けるんだ。複製中にエラーを修正するためのいくつかの機構があるけど、それでもウイルスは時間とともに変異する。新しい変異が生じると、より容易に広がったりワクチンを回避したりするバリアントが出てきて、公衆衛生上の大きな懸念を引き起こす。

バリアント追跡の重要性

SARS-CoV-2の進化を監視することは公衆衛生にとって重要なんだ。科学者たちはウイルスの大規模な配列解読を行い、どのように広がって進化するかを理解しようとしている。バリアントは、懸念されるバリアント、注目されるバリアント、監視下のバリアントなど、いくつかのカテゴリーに分類される。

COVID-19の検査方法

リアルタイム定量PCR(RT-qPCR)がウイルスを検出するために一般的に使われていて、高感度なんだ。ただ、ウイルスの遺伝的構成についての情報は提供しないんだ。この情報を得るためには、全ゲノム配列解読(WGS)が使われるんだ。いくつかのWGSのためのプロトコルが開発されていて、それぞれに長所と短所がある。

様々な配列解読プロトコルの比較

いくつかの研究で、研究者たちはウイルス量が少ないサンプルでどのプロトコルがうまく機能するかを比較したんだ。これらのプロトコルには、ARTIC法のバージョン、SNAPというプロトコル、そしてQiaseq、Midnight、Entebbeといった他のものが含まれている。

ARTIC法はシンプルで効果的なので広く使われているけど、SNAPとQiaseqは商業的なプロトコルなんだ。研究では、ウイルスの量によって異なるプロトコルがどれだけ効果的かがわかった。

環境サンプルを別のソースとして

研究者たちは、ウイルス検出のために廃水といった環境サンプルの使用を探ってきた。これらのサンプルは通常ウイルス濃度が低いけど、新しいバリアントの早期警告を提供することができる。しかし、これらのサンプルから遺伝物質を抽出する方法は非効率的な場合が多いから、もっと敏感な技術を開発する必要があるんだ。

新しいプロトコルの開発

既存のプロトコルが抱える課題を考慮して、研究者たちは低ウイルス量のサンプルでもより効果的にウイルスを検出する新しい方法を作ることを目指したんだ。彼らはローリングサークル増幅という技術を既存のARTICプロトコルと組み合わせて、検出能力を高めることにした。

初期テストでは、新しい方法が改善された結果を示した。遺伝物質の収量が増え、より正確な配列解読とバリアントの特定が可能になったんだ。

研究で使用された方法

研究のために、ウイルスの合成サンプルを作成して様々なテストを行った。サンプルを希釈して、異なるプロトコルがウイルスの量によってどれだけうまく機能するかを評価した。また、SARS-CoV-2の培養したバリアントの実際のサンプルも使ってプロトコルをさらに評価した。

ARTICプロトコルは合成サンプルと培養サンプルの両方で最高の遺伝物質の量を生成することがわかったが、他のプロトコルは効果のレベルが異なっていた。新しい方法、ARTIC-Ampも従来のARTICプロトコルと比較してどうかテストされた。

結果:各プロトコルの効果

結果を評価すると、異なるプロトコルが異なる状況でより良く機能することが明らかになった。ARTICプロトコルは高ウイルス量のサンプルでは一貫して高い遺伝物質の量を生成していた。

しかし、新しいARTIC-Ampプロトコルは低ウイルス量のサンプルで従来のARTIC方法を上回り、より良い収量とウイルスの遺伝子配列に関する完全なデータを提供した。結果は、この新しい方法が廃水のような挑戦的なサンプルでウイルスの検出を大幅に改善できる可能性があることを示している。

公衆衛生への影響

SARS-CoV-2を正確に検出し配列解読する能力は公衆衛生にとって重要なんだ。ウイルスがどのように進化するかを理解することで、保健当局は新しいバリアントに効果的に対応できる。追跡手法の強化はワクチンの効果を改善し、治療オプションを知らせることができる。

ARTIC-Ampプロトコルは特にウイルス量が低い環境での検出を進めるための有望な方向性を提供している。コミュニティや廃水監視のある環境でのウイルスの存在を監視する上で重要な役割を果たすかもしれない。

結論

続いているCOVID-19パンデミックは、効果的な検査と監視戦略の重要性を強調している。ウイルスが進化し続ける中で、その広がりを追跡する方法も進化しなければならない。ARTIC-Ampのような改善されたプロトコルの開発は、検出の精度を高め、最終的には公衆衛生の取り組みをサポートすることにつながる。

これらの方法の研究と改良を続けることで、COVID-19や類似の感染症によってもたらされる将来の課題により良く対応できるようになるだろう。

オリジナルソース

タイトル: A Benchmark of methods for SARS-CoV-2 whole genome sequencing and development of a more sensitive method

概要: The raging COVID-19 pandemic caused by SARS-CoV-2 has so far claimed the lives of 4.6 million people and continues to infect many more. Further, virus evolution has caused mutations that have compromised public health interventions like vaccination regimes and monoclonal antibody and convalescent sera treatments. In response, unprecedented large-scale whole genome viral surveillance approaches have been devised to keep track of the evolution and transmission patterns of the virus within and across populations. Here, we aimed to compare efficiencies of SARS-CoV-2 whole genome sequencing approaches using synthetic SARS-CoV-2 genome and six cell culture SARS-CoV-2 variants titrated to represent samples at high, medium, and low viral load. We found that the ARTIC protocols performed best in terms of PCR amplicon yield returning 67% more amplicons than Entebbe protocol which was the second highest PCR amplicon yielding protocol. ARTIC v4.1 protocol yields were only slightly better than ARTIC v3. Despite yielding the lowest PCR amplicons, the SNAP protocol showed the highest genome completeness using a synthetic genome at high viral titre followed by ARTIC protocols. However, the ARTIC protocols showed highest genome completeness with cell culture SARS-CoV-2 variants across high, medium and low viral titres. ARTIC protocol also performed best in calling the correct lineage among cell culture SARS-CoV-2 variants across different viral titres. We also designed a new method termed ARTIC-Amp which leverages ARTIC protocol and performs a rolling circle amplification to increase yield of amplicons. In a proof-of-principle experiment, this method showed 100% coverage in all four targeted genes across three replicates unlike the ARTIC protocol missed one gene in two of the three replicates. Our results demonstrate the robustness of the ARTIC protocol and propose an improved method that could be useful for samples that routinely have limited SARS-CoV-2 RNA such as wastewater samples. Contribution to the field

著者: Ioannis Ragoussis, A. Bayega, S. Reiling, I. Dubuc, A. Gravel, L. Flamand

最終更新: 2024-10-10 00:00:00

言語: English

ソースURL: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.10.09.24313595

ソースPDF: https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2024.10.09.24313595.full.pdf

ライセンス: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

変更点: この要約はAIの助けを借りて作成されており、不正確な場合があります。正確な情報については、ここにリンクされている元のソース文書を参照してください。

オープンアクセスの相互運用性を利用させていただいた medrxiv に感謝します。

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