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Avanzamenti nell'imaging del tessuto cerebrale congelato

Nuove tecniche migliorano lo studio delle malattie cerebrali attraverso l'analisi dei tessuti conservati.

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Quando una persona muore, capire cosa succede nel suo Cervello può essere fondamentale per studiare Malattie come la sclerosi multipla. Un modo per farlo è preservare il Tessuto cerebrale dopo la morte, così gli scienziati possono studiarlo in seguito. Il tessuto deve essere maneggiato con cura per mantenere intatte la sua struttura e funzione. Questo articolo parlerà di come il tessuto cerebrale venga congelato, conservato e studiato usando tecniche di imaging avanzate.

Congelamento e Conservazione del Tessuto Cerebrale

Dopo la morte di una persona, il suo cervello può essere congelato rapidamente per preservare materiali biologici importanti come DNA, RNA e proteine. Il processo di congelamento è veloce e comprende il taglio del cervello in piccoli pezzi, solitamente di circa 1-2 cm di spessore. Questi pezzi vengono poi immersi in un liquido speciale che li raffredda molto rapidamente, aiutando a prevenire danni durante il congelamento. La temperatura per questo processo è solitamente tra -70 °C e -160 °C. Dopo questo congelamento iniziale, il tessuto viene spesso conservato a -80 °C per una preservazione a lungo termine.

Per gli scienziati analizzare efficacemente il tessuto cerebrale, deve essere tagliato in sezioni sottili. Tuttavia, questo di solito avviene a temperature più calde, tra -7 °C e -10 °C, in modo che il tessuto rimanga idoneo per lo studio.

Targetizzazione di Aree Specifiche nel Cervello

Per studiare regioni specifiche del cervello per malattie, gli scienziati devono sapere dove si trovano queste aree. Possono usare tecniche di imaging per identificare questi punti prima che la persona muoia, poco dopo la morte, o sul tessuto conservato stesso. L'imaging può aiutare i ricercatori a pianificare efficacemente i loro studi, anche se a volte può diventare complicato.

Gli strumenti di imaging possono essere particolarmente utili nello studio di disturbi neurologici e lesioni cerebrali. Questi strumenti permettono agli scienziati di vedere come i tessuti si comportano in diverse condizioni, il che può aiutare a informare studi futuri sul cervello.

Sfide con l'Imaging del Tessuto Congelato

Una delle principale sfide con l'imaging del tessuto cerebrale congelato è la rapida perdita di segnale dai protoni nei tessuti. Questo rende difficile ottenere immagini chiare usando tecniche di imaging standard. Tuttavia, la ricerca ha dimostrato che il tessuto congelato può ancora essere immaginato efficacemente, ma deve essere fatto alle giuste temperature.

Per raccogliere immagini chiare, i ricercatori hanno sperimentato temperature attorno ai -16,6 °C. Hanno dimostrato che tecniche di imaging speciali possono essere usate per studiare il tessuto congelato, anche se i metodi standard affrontano sfide. È cruciale trovare la temperatura giusta che mantiene la qualità del tessuto mentre consente anche un imaging efficace.

L'Importanza dell'Integrità dell'RNA

Un focus specifico nella preservazione del tessuto cerebrale è mantenere l'RNA sicuro. L'RNA è cruciale per capire come funzionano le cellule e può servire come marcatore per la salute del tessuto. I ricercatori hanno testato modi per misurare la qualità dell'RNA dal tessuto cerebrale congelato e hanno scoperto che degrada nel tempo a temperature diverse.

Determinando quanto velocemente degrada l'RNA, gli scienziati possono scegliere temperature ottimali per mantenere l'integrità sia dell'RNA che del tessuto stesso durante l'imaging. Questo è particolarmente importante perché mantenere la qualità dell'RNA è vitale per risultati accurati negli studi futuri.

Preparazione per l'Imaging MRI

Per preparare il tessuto cerebrale per l'imaging MRI, i ricercatori hanno fatto passi significativi. Usando tessuto cerebrale di topo come modello, hanno analizzato la stabilità dell'RNA a varie temperature. Dopo aver determinato le condizioni migliori per mantenere la qualità dell'RNA, hanno preparato l'allestimento per la MRI. Questo ha comportato collocare blocchi di tessuto congelato in una camera speciale che consentisse un raffreddamento efficiente durante il processo di imaging.

La camera è stata progettata per mantenere temperature fredde mentre consentiva un trasporto e un'operazione sicuri all'interno del sistema di imaging. Utilizzando un refrigeratore a riciclo, i ricercatori potevano garantire una temperatura costante durante l'imaging per prevenire qualsiasi perdita di RNA o qualità del tessuto.

Esecuzione di MRI su Tessuto Freddo

I ricercatori hanno effettuato con successo scansioni MRI su campioni di tessuto cerebrale freddi. L'imaging è stato effettuato utilizzando una bobina a radiofrequenza progettata su misura che si adattava perfettamente attorno alla camera del tessuto, consentendo immagini ad alta risoluzione del cervello. Questo allestimento ha permesso agli scienziati di visualizzare varie strutture all'interno del cervello, comprese le aree colpite da malattie.

Durante l'imaging, la temperatura del tessuto è stata monitorata attentamente. I test iniziali indicavano che il sistema di raffreddamento era efficace, mantenendo basse temperature che preservavano l'RNA mentre fornivano risultati di imaging adeguati.

Osservazione di Dettagli Anatomici e Patologici

L'imaging del tessuto cerebrale freddo ha fornito informazioni chiare sulla sua struttura. Immagini ad alta risoluzione hanno rivelato dettagli importanti, comprese le linee di confine tra diversi tipi di materia cerebrale e vasi sanguigni. I ricercatori hanno anche potuto identificare lesioni all'interno del cervello, che sono critiche per comprendere le malattie.

Ogni blocco di tessuto congelato ha mantenuto la sua forma durante l'imaging, permettendo ai ricercatori di mirare a aree specifiche per ulteriori analisi senza perdere informazioni sulla condizione originale del tessuto.

Considerazioni di Sicurezza nel Maneggio del Tessuto

Una delle principali preoccupazioni quando si lavora con tessuto cerebrale umano è la sicurezza. I ricercatori hanno usato una camera sigillata per prevenire la diffusione di particelle aerodisperse durante il maneggio dei campioni. Questo era importante non solo per la sicurezza di chi era coinvolto, ma anche per mantenere la qualità del tessuto durante tutto il processo.

Inoltre, è stato utilizzato un congelatore portatile per mantenere il tessuto a una temperatura sicura mentre veniva trasportato alla struttura per l'imaging. Questo ha garantito che la qualità dell'RNA fosse preservata, consentendo un imaging riuscito all'arrivo.

Direzioni Future per la MRI nella Ricerca Cerebrale

I progressi nell'imaging del tessuto cerebrale congelato aprono nuove strade per la ricerca. I ricercatori possono ora esaminare grandi collezioni di tessuti umani congelati prima di analisi più dettagliate. Questo può aiutare a guidare studi futuri sulle malattie cerebrali, poiché possono identificare aree chiave per un esame più ravvicinato.

La capacità di regolare le condizioni di imaging in base alla temperatura e ad altri fattori aiuterà anche gli scienziati a comprendere come diversi fattori influenzano il segnale MRI. Man mano che il campo evolve, continua l'esplorazione di queste tecniche contribuirà a una comprensione più profonda sia dell'anatomia cerebrale normale che dei cambiamenti che si verificano durante la malattia.

Conclusione

In sintesi, il processo di preservazione e imaging del tessuto cerebrale congelato ha fatto significativi progressi. Con un maneggio attento e tecniche innovative, i ricercatori possono studiare varie condizioni che colpiscono il cervello senza compromettere la qualità del tessuto. Questo lavoro non solo migliora la nostra comprensione delle malattie cerebrali, ma apre anche la strada a nuovi approcci nella ricerca cerebrale. La capacità di mantenere l'integrità dell'RNA mentre si esegue imaging ad alta risoluzione segna un avanzamento significativo che può avvantaggiare studi futuri in neurobiologia e patologia.

Fonte originale

Titolo: Postmortem MRI of Tissue Frozen at Autopsy

Estratto: IntroductionPostmortem MRI provides insight into location of pathology within tissue blocks, enabling efficient targeting of histopathological studies. While postmortem imaging of fixed tissue is gaining popularity, imaging tissue frozen at the time of extraction is significantly more challenging. MethodsTissue integrity was examined using RNA integrity number (RIN), in mouse brains placed between -20 {degrees}C and 20 {degrees}C for up to 24 hours, to determine the highest temperature that could potentially be used for imaging without tissue degeneration. Human tissue frozen at the time of autopsy was sealed in a tissue chamber filled with 2-methylbutane to prevent contamination of the MRI components. The tissue was cooled to a range of temperatures in a 9.4T MRI using a recirculating aqueous ethylene glycol solution. MRI was performed using a magnetization-prepared rapid gradient echo (MPRAGE) sequence with inversion time of 1400 ms to null the signal from 2-methylbutane bath, isotropic resolution between 0.3-0.4 mm, and scan time of about 4 hours was used to study the anatomical details of the tissue block. Results and DiscussionA temperature of -7 {degrees}C was chosen for imaging as it was below the highest temperature that did not show significant RIN deterioration for over 12 hours, at the same time gave robust imaging signal and contrast between brain tissue types. Imaging performed on various human tissue blocks revealed good gray-white matter contrast and revealing subpial, subcortical, and deep white matter lesions typical of multiple sclerosis enabling further spatially targeted studies. ConclusionHere, we describe a new method to image cold tissue, while maintaining tissue integrity and biosafety during scanning. In addition to improving efficiency of downstream processes, imaging tissue at sub-zero temperatures may also improve our understanding of compartment specificity of MRI signal.

Autori: Govind Nair, R. Sun, H. Merkel, K. Hoskin, K. Bree, S. Dodd, A. Koretsky

Ultimo aggiornamento: 2024-01-23 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.20.576456

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.01.20.576456.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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