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Sviluppi nei Indicatori di Volt per l'Attività Neurale

Nuovi indicatori di voltaggio migliorano l'accuratezza delle misurazioni nel segnale neuronale.

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Gli indicatori di tensione sono strumenti che aiutano gli scienziati a misurare i cambiamenti nei segnali elettrici dei neuroni. Queste misurazioni sono fondamentali per capire come funzionano e comunicano i neuroni. Gli scienziati puntano a creare indicatori di tensione che possano rilevare questi cambiamenti senza danneggiare le cellule. L'indicatore di tensione ideale dovrebbe rispondere rapidamente, essere abbastanza luminoso per catturare immagini chiare e essere sicuro per un uso a lungo termine.

La sfida degli indicatori tradizionali

Storicamente, gli scienziati usavano indicatori a base di proteine per misurare la tensione nei neuroni. Anche se questi indicatori di tensione codificati geneticamente (GEVIs) sono mirati a cellule specifiche, spesso hanno difficoltà con la luminosità e la stabilità. Questo è dovuto alle proprietà delle proteine fluorescenti, che non brillano così intensamente o durano così a lungo come i coloranti sintetici.

Nuovi sviluppi negli indicatori di tensione

Recenti progressi hanno introdotto indicatori ibridi. Questi combinano le migliori caratteristiche dei coloranti sintetici e degli indicatori codificati geneticamente. Ad esempio, alcuni nuovi indicatori utilizzano un tipo di proteina sensibile alla luce chiamata rodopsina microbica. Questi indicatori possono reagire rapidamente ai cambiamenti di tensione. Tuttavia, a volte hanno bassa luminosità.

Migliorare luminosità e stabilità

Per superare le limitazioni degli indicatori tradizionali, gli scienziati hanno sviluppato il trasferimento di energia della fluorescenza elettrocromica (eFRET). Questa tecnica utilizza un colorante luminoso che cambia la sua emissione di luce in base allo stato elettrico del neurone. Quando combinati con la rodopsina, questi indicatori possono fornire eccellenti misurazioni di tensione.

Uno di questi indicatori, chiamato Voltron, utilizza la rodopsina fusa con un colorante. Questa fusione consente registrazioni di tensione sensibili in vari organismi, come topi e pesci.

La promessa degli indicatori di tensione ibridi

Un altro approccio prevede la creazione di indicatori di tensione ibridi (HVI) legando piccoli coloranti direttamente alle proteine di rodopsina. Questi nuovi indicatori mostrano una sensibilità migliorata e possono immagine cambiamenti di tensione in tempo reale per periodi prolungati. Tuttavia, questi HVI hanno limitazioni nell'imaging in vivo a causa della necessità di etichettatura con enzimi.

Introducendo Solaris

Un indicatore innovativo chiamato Solaris è stato sviluppato per migliorare la sensibilità alla tensione. Solaris presenta una versione aggiornata della proteina HaloTag inserita nella struttura della rodopsina. Questo consente a Solaris di connettersi con diversi tipi di coloranti, aumentando la sua versatilità per l'imaging.

Solaris è particolarmente efficace nel rilevare Potenziali d'azione, che sono picchi di attività elettrica nei neuroni. Può rispondere ai cambiamenti di tensione in modo più efficace rispetto ad alcuni indicatori precedenti. Gli scienziati hanno dimostrato che Solaris può misurare i cambiamenti di tensione in cellule coltivate e sta iniziando a essere testato in neuroni vivi.

Confronto con indicatori precedenti

Quando gli scienziati confrontano Solaris con indicatori precedenti come Voltron, scoprono che Solaris ha una risposta alla tensione molto più ampia. Questo rende più facile catturare dati significativi sull'attività neuronale. I miglioramenti in Solaris consentono immagini più chiare e una migliore comprensione delle dinamiche elettriche dei neuroni.

Capacità di imaging multiplexato

Un grande vantaggio di Solaris è la sua capacità di lavorare insieme ad altri indicatori. Questo significa che gli scienziati possono monitorare più segnali cellulari contemporaneamente, come i livelli di tensione e calcio nei neuroni. Questo è importante per capire come interagiscono i diversi segnali durante l'attività neuronale.

Ad esempio, gli scienziati hanno usato Solaris per osservare i potenziali d'azione mentre tracciavano anche i picchi di calcio nei neuroni. Queste informazioni possono aiutare i ricercatori a capire come i neuroni comunicano e processano le informazioni.

Il ruolo dell'imaging della durata di fluorescenza

Un'altra innovazione prevede l'uso dell'imaging della durata di fluorescenza (FLIM) con Solaris. Mentre l'imaging tradizionale misura i cambiamenti nella luminosità, il FLIM misura i cambiamenti di quanto a lungo dura il segnale fluorescente. Questo può fornire informazioni più accurate sullo stato del neurone.

Il FLIM è stato utilizzato con successo con altri indicatori di tensione, ma Solaris offre una sensibilità maggiore. Questo consente agli scienziati di catturare meglio piccoli cambiamenti di tensione, fornendo un quadro più dettagliato della funzione neuronale.

Conclusione

Lo sviluppo di Solaris e di altri avanzati indicatori di tensione rappresenta un passo avanti significativo nella neuroscienza. Questi strumenti permettono ai ricercatori di ottenere preziose informazioni sull'attività elettrica dei neuroni senza danneggiarli. Man mano che gli scienziati continueranno a perfezionare questi indicatori, ci aspettiamo di imparare ancora di più sui complessi meccanismi del cervello.

Migliorando la nostra comprensione del segnale neuronale, queste innovazioni possono portare a migliori trattamenti per i disturbi neurologici e progressi nella ricerca sul cervello. I ricercatori sono ottimisti che ulteriori miglioramenti renderanno questi indicatori ancora più efficaci in varie applicazioni, incluso l'imaging in vivo negli organismi viventi. Ulteriori miglioramenti, specialmente relativi al loro uso nei sistemi vivi, allargheranno probabilmente le possibilità di studiare l'attività cerebrale in tempo reale.

Fonte originale

Titolo: Solaris: a panel of bright and sensitive hybrid voltage indicators for imaging membrane potential in cultured neurons

Estratto: Dynamic changes in the membrane potential underlie neuronal activities. Fluorescent voltage indicators allow optical recording of electrical signaling across a neuronal population with cellular precision and at millisecond-level temporal resolution. Here we report the design and characterization of a chemigenetic hybrid voltage indicator, Solaris, in which a circularly permuted HaloTag is inserted into the first extracellular loop of Acetabularia rhodopsin. Solaris is compatible with fluorogenic HaloTag ligands JF525, JF549, JF552, JF585, and JF635. The most sensitive conjugate, Solaris585, has more than 2-fold higher voltage sensitivity than the spectrally similar Voltron2585 ({Delta}F/F0 = -28.1 {+/-} 1.3% versus -12.3 {+/-} 0.7% per action potential in cultured neurons). Solaris585 supports the measurement of optogenetically evoked spike activity or dual-color imaging in conjunction with green-emitting calcium or glutamate indicators. Solaris indicators are also applicable to fluorescence lifetime imaging, which probes the absolute membrane potential. This new hybrid voltage indicator is a valuable tool for imaging neuronal electrophysiological activities in cultured cells with substantially improved dynamic range compared to previous hybrid indicators.

Autori: Peng Zou, J. Yang, S. Zhu, L. Yang, L. Peng, Y. Han, R. F. Hayward, P. Park, D. Hu, A. E. Cohen

Ultimo aggiornamento: 2024-02-04 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.02.578569

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.02.578569.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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