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I microbi si evolvono per sopravvivere al caldo estremo

I ricercatori rivelano come l'E. coli si adatta a temperature elevate tramite cambiamenti nell'espressione genica.

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I microrganismi sono piccole cose vive che possono fare cose incredibili, soprattutto in laboratorio. Un metodo che i ricercatori usano per migliorare ulteriormente questi microrganismi si chiama Evoluzione Laboratoriale Adaptiva (ALE). Questo processo aiuta gli scienziati a creare microrganismi in grado di prosperare in condizioni difficili e mostrare nuove caratteristiche. Queste caratteristiche possono dirci di più su come funziona la vita in generale.

Nell'ALE, un microrganismo inizia a crescere in un ambiente specifico. I ricercatori lasciano crescere queste cellule per molte generazioni, concentrandosi sui momenti in cui i microrganismi crescono rapidamente. Durante questo tempo, alcune cellule cambieranno naturalmente, o si muteranno. Quelle che riescono a crescere meglio nelle condizioni date sopravvivono e aumentano di numero. Questo significa che la popolazione di microrganismi cambierà lentamente e diventerà migliore nel sopravvivere in quelle condizioni difficili.

Quando l'obiettivo è creare microrganismi in grado di tollerare lo stress, gli scienziati li mettono in un ambiente difficile, come temperature più elevate. Man mano che i microrganismi si adattano allo stress, i ricercatori aumentano il livello di stress per incoraggiare un adattamento ancora migliore. Studiare questi nuovi ceppi può insegnarci come le cellule affrontano lo stress, come si evolvono i patogeni e molto altro.

Di solito, i ricercatori studiano questi ceppi evoluti esaminando il loro DNA per trovare Mutazioni che li aiutano a sopravvivere meglio. Nella maggior parte dei casi, questi ceppi hanno solo poche modifiche nel loro codice genetico. Tuttavia, sotto stress estremo, alcuni microrganismi possono accelerare la velocità con cui apportano cambiamenti, portando a molte mutazioni contemporaneamente. Questo rende difficile capire quali cambiamenti siano importanti perché possono interagire in modi inaspettati.

Un modo per comprendere meglio queste mutazioni è osservare come i microrganismi esprimono i loro geni, il che può cambiare a seconda di vari fattori come lo stress. Quando i ricercatori analizzano tutti i geni che sono accesi o spenti, potrebbero trovare modelli che aiutano a spiegare le adattamenti dei microrganismi. Tuttavia, poiché molti geni potrebbero mostrare cambiamenti, può essere difficile avere un quadro chiaro di cosa stia succedendo.

Per rendere questa analisi più semplice, gli scienziati hanno sviluppato un metodo chiamato analisi di set di geni modulati in modo indipendente, o analisi iModulon. Questo metodo aiuta i ricercatori a identificare gruppi di geni che lavorano insieme elaborando grandi quantità di dati sull'Espressione genica. Con questo approccio, i ricercatori possono concentrarsi su gruppi di geni invece di cercare di esaminare ogni gene singolarmente, semplificando notevolmente la loro analisi.

L'analisi iModulon è stata utile per studiare molti tipi di microrganismi. Aiuta a organizzare dati complessi e fornisce informazioni utili che possono portare a nuove scoperte. I ricercatori hanno lavorato con un grande set di dati chiamato PRECISE-1K, che contiene migliaia di profili di espressione genica da E. Coli, un microrganismo comune che serve come organismo modello per molti studi.

In questo studio, gli scienziati si sono concentrati su ceppi evoluti di E. coli in grado di tollerare alte temperature e hanno analizzato come riescono a crescere in condizioni così estreme. Utilizzando l'analisi iModulon, i ricercatori sperano di scoprire le strategie che questi ceppi evoluti usano per sopravvivere e prosperare nonostante il calore.

Evoluzione dei Microrganismi per Tolleranza al Calore

I ricercatori hanno iniziato il loro studio partendo da un ceppo di E. coli che poteva crescere a 42°C e lo hanno evoluto ulteriormente per vedere se riuscivano a renderlo tollerante a temperature ancora più alte. Facendo ciò, hanno spinto i limiti di ciò che questo microrganismo poteva sopportare. Hanno creato sei nuovi ceppi che potevano crescere a temperature fino a 45,3°C, che è generalmente letale per il ceppo originale.

Per raggiungere questa maggiore tolleranza, questi nuovi ceppi hanno mostrato un fenotipo di ipermutatore, il che significa che potevano mutare il loro DNA a un ritmo aumentato. Di conseguenza, hanno accumulato un gran numero di mutazioni, rendendo difficile analizzare e comprendere completamente i loro cambiamenti genetici.

Per approfondire le adattamenti di questi ceppi, i ricercatori hanno raccolto dati sull'espressione genica dei ceppi evoluti a varie temperature. Hanno confrontato questi risultati con il ceppo originale per determinare come i microrganismi hanno cambiato la loro espressione genica in risposta alla temperatura. È interessante notare che, nonostante avessero molte mutazioni nei loro genomi, i ceppi mostrano solo alcune importanti modifiche nei loro modelli di espressione genica.

Concentrandosi sui dati di espressione genica, i ricercatori hanno identificato diverse strategie importanti che questi ceppi evoluti di E. coli hanno utilizzato per affrontare alte temperature. Queste includevano cambiamenti nel modo in cui rispondevano allo stress, migliorate capacità di movimento, aggiustamenti al loro metabolismo e alterazioni a determinati sistemi che aiutano a prendere nutrienti essenziali.

Comprendere i Meccanismi in Gioco

I ricercatori hanno esplorato cinque meccanismi principali che questi ceppi evoluti hanno utilizzato per adattarsi ad alte temperature:

1. Regolazione delle Risposte allo Stress

Uno dei cambiamenti principali osservati era che la risposta generale allo stress, nota come via RpoS, era inibita. Questo significa che, man mano che i ceppi evolvevano, attivavano un'altra via chiamata RpoH, che è più specializzata per affrontare alte temperature. Passando a questa risposta specializzata, i ceppi potevano crescere meglio e affrontare il calore.

2. Modifiche nel Movimento

Un altro importante risultato era legato alla motilità. I ceppi evoluti mostravano cambiamenti nel modo in cui controllavano il loro movimento. I geni responsabili della costruzione dei flagelli, le strutture che permettono ad alcuni microrganismi di nuotare, venivano espressi diversamente. Normalmente, quando le temperature sono alte, il sistema di secrezione per queste strutture diventa meno efficiente.

I ricercatori hanno scoperto che questi ceppi evoluti riuscivano comunque a esprimere il componente del corpo basale del flagello, ma sopprimevano l'espressione del filamento, che è la parte che aiuta a muoversi. Questo aggiustamento potrebbe aiutare i microrganismi a conservare energia durante condizioni stressanti.

3. Cambiamenti nel Metabolismo

I ceppi evoluti presentavano anche un cambiamento nel loro metabolismo. A temperature elevate, la disponibilità di ossigeno diminuisce, rendendo più difficile per le cellule fare affidamento sulla respirazione aerobica, che utilizza ossigeno per generare energia. I ricercatori hanno osservato che i ceppi evoluti hanno diminuito l'espressione dei geni del metabolismo aerobico e si sono orientati verso vie più anaerobiche. Questo cambiamento ha permesso loro di continuare a crescere in modo efficiente sotto stress.

4. Aggiustamenti nell'Assorbimento del Ferro

Il ferro è un nutriente cruciale per i microrganismi, e la sua disponibilità può cambiare con la temperatura. I ricercatori hanno scoperto che i ceppi evoluti hanno modificato i loro sistemi di assorbimento del ferro. Hanno abbandonato la sintesi di siderofori che vengono utilizzati per raccogliere il ferro a temperature più basse e hanno iniziato a utilizzare trasportatori più semplici che funzionano meglio in condizioni più calde. Questa adattamento ha minimizzato il costo energetico di assorbimento del ferro ad alte temperature.

5. Esplorando Geni Sconosciuti

Infine, lo studio ha identificato un operone di geni precedentemente non caratterizzati, chiamato yjfIJKL, che era fortemente regolato a lungo nei ceppi evoluti. Le predizioni strutturali per questi geni indicavano che potrebbero aiutare a migliorare la stabilità delle membrane del microrgano a temperature elevate. Questo suggerisce che questi geni sconosciuti potrebbero avere un ruolo nella tolleranza complessiva al calore dei microrganismi.

Implicazioni dei Risultati

Queste scoperte evidenziano alcuni principi importanti su come i microrganismi possono adattarsi a ambienti estremi:

  1. Semplificazione delle Risposte: I ceppi evoluti hanno dimostrato che possono migliorare la loro crescita semplificando le loro risposte generali allo stress mentre mantengono risposte specializzate ed efficaci al calore.

  2. Gestione dei Danni alle Proteine: La necessità di gestire l'aggregazione delle proteine ad alte temperature è stata importante. I ceppi si sono adattati modificando i loro sistemi di trasporto delle proteine per gestire meglio le proteine danneggiate.

  3. Miglioramento della Stabilità della Membrana: Regolando verso l'alto alcune proteine che aiutano a mantenere la stabilità della membrana, i ceppi evoluti hanno migliorato le loro possibilità di sopravvivenza in ambienti difficili e ad alte temperature.

Questi risultati non solo contribuiscono alla nostra comprensione di come i microrganismi si adattino a condizioni estreme, ma hanno anche potenziali applicazioni pratiche. Ad esempio, queste strategie potrebbero essere utili per ingegnerizzare microrganismi in grado di produrre composti desiderati in processi industriali dove alte temperature o condizioni di bassa ossigeno potrebbero presentare sfide.

Conclusione

In sintesi, lo studio ha dimostrato con successo come utilizzare l'Evoluzione Laboratoriale Adaptiva possa portare allo sviluppo di ceppi di E. coli che resistono ad alte temperature. Impiegando l'analisi iModulon, i ricercatori sono riusciti a scoprire le varie strategie che questi ceppi evoluti hanno utilizzato per adattarsi. L'interazione tra mutazioni genetiche ed espressione genica evidenzia la complessità delle risposte microbiche alle sfide ambientali.

Le intuizioni ottenute da questa ricerca hanno implicazioni sia per la biologia fondamentale che per applicazioni pratiche. Comprendere come microrganismi come E. coli possano prosperare in condizioni estreme potrebbe aiutare a informare studi futuri sulla tolleranza allo stress in vari organismi e contribuire alla progettazione di fabbriche microbiche più efficienti per applicazioni biotecnologiche.

Questa panoramica completa di come i microrganismi si adattino allo stress non solo getta luce su processi biologici di base, ma ha anche il potenziale di avere un impatto significativo in vari campi che vanno dalla medicina alla scienza ambientale e ai processi industriali. Ulteriori ricerche in questo settore continueranno a approfondire la nostra comprensione della vita microbica e della sua straordinaria capacità di adattarsi e prosperare in ambienti diversi.

Fonte originale

Titolo: Laboratory evolution reveals transcriptional mechanisms underlying thermal adaptation of Escherichia coli

Estratto: Adaptive laboratory evolution (ALE) is able to generate microbial strains which exhibit extreme phenotypes, revealing fundamental biological adaptation mechanisms. Here, we use ALE to evolve Escherichia coli strains that grow at temperatures as high as 45.3{degrees}C, a temperature lethal to wild type cells. The strains adopted a hypermutator phenotype and employed multiple systems-level adaptations that made global analysis of the DNA mutations difficult. Given the challenge at the genomic level, we were motivated to uncover high temperature tolerance adaptation mechanisms at the transcriptomic level. We employed independently modulated gene set (iModulon) analysis to reveal five transcriptional mechanisms underlying growth at high temperatures. These mechanisms were connected to acquired mutations, changes in transcriptome composition, sensory inputs, phenotypes, and protein structures. They are: (i) downregulation of general stress responses while upregulating the specific heat stress responses; (ii) upregulation of flagellar basal bodies without upregulating motility, and upregulation fimbriae; (iii) shift toward anaerobic metabolism, (iv) shift in regulation of iron uptake away from siderophore production, and (v) upregulation of yjfIJKL, a novel heat tolerance operon which we characterized using AlphaFold. iModulons associated with these five mechanisms explain nearly half of all variance in the gene expression in the adapted strains. These thermotolerance strategies reveal that optimal coordination of known stress responses and metabolism can be achieved with a small number of regulatory mutations, and may suggest a new role for large protein export systems. ALE with transcriptomic characterization is a productive approach for elucidating and interpreting adaptation to otherwise lethal stresses.

Autori: Bernhard Palsson, K. Rychel, K. Chen, E. A. Catoiu, C. A. Olson, T. E. Sandberg, Y. Gao, S. Xu, Y. Hefner, R. Szubin, A. Patel, A. M. Feist

Ultimo aggiornamento: 2024-02-23 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.22.581624

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.22.581624.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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