Impatto dei ritardi sulla precisione dei test della carica virale HIV

Il test della carica virale (VL) è un aspetto importante nella gestione dell'HIV. Aiuta a monitorare quanto bene funziona il trattamento per le persone che vivono con l'HIV. L'obiettivo è assicurarsi che chi è infetto venga diagnosticato, curato con farmaci e che il virus sia sotto controllo. Il Sudafrica ha il programma di trattamento per l'HIV più grande al mondo, con oltre 6 milioni di persone che ricevono assistenza. Per monitorare la loro salute, gli ospedali eseguono milioni di test VL ogni anno.

Tuttavia, ci sono delle sfide nel processo di Testing. Queste sfide possono verificarsi persino prima che i Campioni arrivino in laboratorio, come il modo in cui trasportare i campioni correttamente, come registrarli e come conservarli in modo adeguato. Questi fattori possono influenzare la qualità dei risultati dei test.

Le linee guida per il testing suggeriscono che i campioni di sangue debbano essere elaborati entro un certo periodo di tempo per garantire risultati accurati. Ad esempio, alcuni produttori raccomandano che i campioni di sangue vengano separati in plasma entro 6-24 ore dalla raccolta. Se i campioni non vengono elaborati rapidamente, potrebbe essere necessario congelarli per mantenere la loro qualità. Questo è spesso difficile da realizzare, specialmente nei luoghi dove le risorse sono limitate. A volte, i campioni possono arrivare in laboratorio dopo 24 ore e potrebbero essere conservati a temperatura ambiente prima del test. I ricercatori hanno studiato come questi ritardi e le condizioni di stoccaggio influenzino l'accuratezza dei risultati dei test.

#Obiettivi dello studio

Lo studio mirava a scoprire:

1. In che modo il ritardo nel test influisce sull'accuratezza delle misurazioni dell'RNA dell'HIV in campioni di sangue non elaborati?
2. Cosa succede all'accuratezza delle misurazioni dell'RNA dell'HIV quando i campioni sono conservati a temperature più alte (tra 25-30°C) prima del test?
3. L'elaborazione del campione (centrifugazione) prima della conservazione porta a risultati più accurati quando il test è ritardato? Inoltre, il salto di un secondo passaggio di centrifugazione influisce sui risultati?

#Metodi

Lo studio ha ricevuto l'approvazione etica da un comitato che esamina la ricerca che coinvolge soggetti umani. I partecipanti erano adulti sopra i 18 anni che hanno accettato di partecipare. Il reclutamento dei pazienti è iniziato alla fine del 2019 e è continuato fino al 2023, con ritardi a causa della pandemia.

La ricerca si è svolta in tre diversi siti di testing. I pazienti sono stati reclutati da cliniche che forniscono trattamento antiretrovirale. Quando i pazienti si presentavano per il loro test VL di routine, venivano chiesti di fornire campioni di sangue extra per lo studio. Tre campioni venivano raccolti durante la stessa prelievo di sangue e inviati al laboratorio per il test.

In laboratorio, un campione veniva elaborato immediatamente, mentre gli altri due venivano conservati a temperatura ambiente per test successivi. Venivano stabiliti diversi punti temporali per controllare come si comportavano i campioni conservati. Un campione veniva verificato dopo quattro giorni, e l'altro dopo sette giorni. Il test della VL veniva effettuato utilizzando metodi standard in ciascun laboratorio partecipante.

#Risultati

Lo studio ha incluso 249 partecipanti, e i campioni di alcuni pazienti (6) che hanno impiegato più di 24 ore per arrivare in laboratorio sono stati esclusi. I test iniziali hanno mostrato una gamma di risultati della VL, con alcuni risultati non rilevabili e altri molto alti.

#Stabilità della carica virale dopo la conservazione

I ricercatori hanno valutato le differenze nei risultati della VL tra il primo giorno e il quarto e il settimo giorno dopo la conservazione. C'è stata solo una leggera variazione nelle letture dal primo giorno al quarto e al settimo giorno, indicando che i risultati sono rimasti stabili anche con ritardi. Per i campioni che avevano una VL più alta (superiore a 2 log copie/mL), i risultati erano coerenti, mostrando poco impatto dal ritardo di tempo.

Tuttavia, per i campioni con bassa VL (meno di 2 log copie/mL), c'era più variazione. Solo poco più della metà di questi campioni aveva risultati coerenti quando venivano ritestati. Questa incoerenza nei risultati vicino al limite di rilevamento è prevista, poiché piccole variazioni possono portare a differenze percentuali maggiori.

#Confronto dei campioni con bassa carica virale

Tra i campioni che inizialmente erano non rilevabili o avevano una VL inferiore a 50 copie/mL, alcuni sono diventati rilevabili durante la ritest. Un totale di 18 pazienti che inizialmente avevano risultati di bassa VL hanno avuto letture più alte nei test successivi. Questo è successo in modo casuale e non sembrava peggiorare nel tempo.

Curiosamente, la probabilità di rilevare il virus nei test successivi era maggiore per i campioni che erano vicini al limite di rilevamento nel primo giorno. I metodi di testing utilizzati in diversi siti di laboratorio sembravano portare a risultati variabili. Alcuni siti avevano una percentuale più alta di campioni che inizialmente mostrano VL non rilevabile che sono diventati rilevabili in seguito.

#Impatto della centrifugazione e delle condizioni di conservazione

Lo studio ha anche esaminato se i campioni che erano stati elaborati inizialmente e poi testati successivamente mostrassero risultati diversi. Per i campioni che erano stati centrifugati e testati di nuovo senza ulteriori elaborazioni, i livelli di VL erano piuttosto simili. Non ci sono stati cambiamenti significativi nella VL quando si sono ritestati questi campioni, suggerendo che l'elaborazione centrifuga iniziale ha aiutato a mantenere l'integrità del campione.

In generale, i ricercatori hanno scoperto che i ritardi nel test avevano un impatto minimo sulle misurazioni della VL, specialmente per i campioni con valori iniziali più alti. Questo è rassicurante, soprattutto in contesti reali dove i ritardi sono comuni a causa di problemi logistici.

#Conclusione

Lo studio fornisce preziose informazioni su come il tempismo e la gestione dei campioni influenzino l'accuratezza del testing della VL dell'HIV. Sebbene sia stata notata una variabilità significativa per i campioni con VL molto bassa, la maggior parte dei risultati è rimasta stabile durante i ritardi nei test. Per i campioni con VL più alta, i ritardi nel test non hanno cambiato significativamente i risultati, il che è cruciale per la gestione dei pazienti.

I fornitori di assistenza sanitaria dovrebbero essere consapevoli della variabilità nell'interpretare i risultati della VL, specialmente all'estremità inferiore, e prendere in considerazione le condizioni in cui i campioni sono conservati. Questa comprensione aiuterà a migliorare la gestione dei pazienti che vivono con l'HIV e garantirà che il testing rimanga affidabile anche di fronte a sfide logistiche.

In sintesi, questa ricerca evidenzia l'importanza di monitorare come vengono gestiti i campioni e sottolinea che i ritardi temporali, sebbene non ideali, non portano necessariamente a letture inaccurate per la maggior parte dei pazienti con cariche virali più alte. Ulteriori ricerche potrebbero esplorare meglio i meccanismi dietro le variabilità a livelli di rilevamento bassi e migliorare le pratiche di testing in ambienti con risorse limitate, migliorando infine l'assistenza ai pazienti.