L'equilibrio tra proteasi e antiproteasi nella salute delle vie aeree
La ricerca rivela il ruolo fondamentale delle proteine nelle infezioni delle vie aeree.
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Indice
Il corpo umano ha molte proteine che svolgono ruoli importanti nel funzionamento delle cellule e nella risposta alle infezioni. Tra queste proteine ci sono gli enzimi noti come Proteasi, che aiutano a scomporre altre proteine nel corpo. Ci sono anche proteine chiamate antiproteasi che contrastano l'attività delle proteasi. Questi due tipi di proteine si bilanciano tra loro per mantenere una corretta funzionalità all'interno delle cellule e dei tessuti, specialmente nel sistema respiratorio.
Le vie aeree, dove respiriamo, contengono molte proteasi e antiproteasi. Questa zona è esposta a varie minacce come germi, allergeni e inquinanti. Anche se la ricerca mostra che la superficie delle vie aeree esprime molte proteasi, pochi studi hanno esaminato specificamente le antiproteasi in quest'area.
Questo equilibrio tra proteasi e antiproteasi è essenziale per varie funzioni nelle vie aeree. Aiuta a gestire la contrazione dei muscoli, la produzione di muco, lo sviluppo delle cellule e le risposte immunitarie del corpo. Quando c’è troppa proteasi, o non abbastanza antiproteasi, possono insorgere diverse malattie polmonari. I ricercatori hanno scoperto che livelli anomali di queste proteine possono aumentare il rischio di Infezioni virali nel sistema respiratorio.
Le infezioni virali spesso iniziano con le proteine nei virus che devono essere tagliate dalle proteasi prima di poter entrare e infettare le cellule umane. Ad esempio, virus come l'influenza e i coronavirus hanno proteine specifiche che richiedono questa azione di taglio per permettere loro di combinarsi con le cellule umane. Usando le proteasi nelle vie aeree, questi virus possono invadere l'ospite e diffondere il loro materiale genetico.
Questa ricerca mira a esplorare i tipi di proteasi e antiproteasi presenti nelle cellule delle vie aeree. Svilupperà anche un modo per misurare quanto sono attive queste proteasi, soprattutto in relazione alle proteine virali. Comprendere questi processi potrebbe aiutare a identificare le persone più suscettibili alle infezioni e sviluppare modi per prevenirle.
Proteasi e Proteine Antiprotezione nelle Vie Aeree
Le proteasi sono enzimi che tagliano le proteine in pezzi più piccoli, mentre le antiproteasi impediscono alle proteasi di agire troppo. Entrambi sono cruciali per un sano funzionamento delle vie aeree. Ci sono molti tipi diversi di proteasi, ciascuna con un modo unico di lavorare. Allo stesso modo, ci sono varie antiproteasi che inibiscono le proteasi. Insieme, creano un equilibrio necessario per mantenere una corretta funzione delle vie aeree.
Nelle vie aeree, questo equilibrio è particolarmente vitale. Quando l'equilibrio si sposta troppo a favore delle proteasi, possono insorgere problemi e malattie nelle vie aeree. Ad esempio, quando c'è troppa attività proteolitica, può causare problemi con i muscoli delle vie aeree, il liquido nei polmoni o con la crescita e la guarigione delle cellule. Questo può influenzare in ultima analisi quanto bene una persona riesce a combattere le infezioni.
Risultati recenti hanno mostrato che i livelli di proteasi e antiproteasi possono cambiare in risposta a Fattori Ambientali come l'inquinamento o il fumo. Comprendere come questi cambiamenti influenzano le infezioni virali nelle vie aeree potrebbe portare a migliori strategie di prevenzione e trattamento.
Studio delle Proteasi nelle Cellule delle Vie Aeree
Questa ricerca si è concentrata sullo studio delle proteasi e delle antiproteasi presenti nelle cellule delle vie aeree coltivate in laboratorio e anche in campioni prelevati da donatori umani sani. L'obiettivo era capire meglio i tipi di proteasi presenti e come agiscono sulle proteine virali.
Inizialmente, i ricercatori hanno raccolto cellule nasali da volontari sani. Queste cellule sono state quindi coltivate in condizioni di laboratorio speciali per svilupparsi in modelli che somigliano strettamente alle cellule reali delle vie aeree. Sia queste cellule coltivate in laboratorio che il fluido nasale dei volontari sono stati utilizzati per i test.
Per analizzare le proteasi e le antiproteasi, gli scienziati hanno utilizzato tecniche avanzate per identificare le diverse proteine presenti nei campioni. Hanno scoperto diverse proteasi e antiproteasi, comprese quelle con vari meccanismi d'azione, evidenziando la complessità dell'ambiente proteolitico delle vie aeree.
Misurare l'Attività delle Proteasi
Per misurare l'attività delle proteasi, i ricercatori hanno sviluppato un nuovo metodo di test che permette di vedere come queste proteine interagiscono con le proteine virali. Questo approccio implica l'osservazione del segnale di fluorescenza generato quando le proteasi agiscono su specifici peptidi virali.
In questo metodo, le cellule delle vie aeree coltivate in laboratorio sono state trattate con un peptide fluorescente che rappresenta un segmento della proteina di un virus. I ricercatori hanno poi monitorato l'aumento della fluorescenza nel tempo per valutare il livello di attività proteolitica. Questo metodo è più facile e richiede meno campioni rispetto alle tecniche tradizionali, rendendolo molto utile.
Impatto dei Fattori Ambientali
La ricerca ha anche esplorato come fattori ambientali come il fumo e l'esposizione agli inquinanti possano influenzare l'attività delle proteasi e delle antiproteasi. È stato riscontrato che questi fattori alterano i livelli e l'attività di queste proteine nelle vie aeree, il che potrebbe aumentare il rischio di infezioni.
Ad esempio, i campioni di fumatori mostrano un livello di attività diverso verso le proteine virali rispetto a quelli che non fumano. Questo suggerisce che fattori legati allo stile di vita possono avere un ruolo significativo nella suscettibilità delle persone alle infezioni respiratorie.
Differenze nell'Attività tra Gruppi
Lo studio ha anche cercato differenze nell'attività proteolitica basata su genere e stato di fumo tra i campioni. I risultati hanno indicato che gli uomini che fumano mostrano un'attività proteolitica più alta verso le proteine virali rispetto alle donne. Curiosamente, confrontando i non fumatori, non c'era una differenza significativa nell'attività basata solo sul genere.
Questi risultati hanno implicazioni importanti, poiché suggeriscono che alcuni gruppi potrebbero essere più inclini a gravi infezioni virali respiratorie a causa di variazioni nella loro attività proteolitica. Identificando queste differenze, si possono sviluppare strategie specifiche per concentrarsi sulle popolazioni a rischio per misure preventive contro le infezioni.
Applicazione per le Proteine Virali
Testare l'attività proteolitica dei campioni delle vie aeree contro le proteine virali ha mostrato che non solo queste proteasi agiscono sul virus dell'influenza, ma rispondono anche in modo simile ai coronavirus. Questo sottolinea il ruolo importante che le proteasi delle vie aeree hanno nelle fasi iniziali delle infezioni virali.
I ricercatori hanno scoperto che le cellule delle vie aeree possono scomporre efficacemente varie proteine virali, indicando che queste proteasi sono attivamente coinvolte nel riconoscere e rispondere a potenziali minacce. Questo fornisce preziose informazioni su come i virus respiratori possono sfruttare queste proteasi per infettare e propagarsi con successo all'interno dei tessuti umani.
Implicazioni Future
I risultati di questa ricerca aprono diverse strade per studi futuri. Comprendere l'equilibrio tra proteasi e antiproteasi nelle vie aeree potrebbe contribuire a progettare migliori strategie terapeutiche per le infezioni virali. Questo è particolarmente rilevante per i virus respiratori che causano una morbilità e mortalità significative in tutto il mondo.
Il nuovo metodo di test sviluppato per valutare l'attività proteolitica sarà utile non solo per studiare virus esistenti ma anche per valutare l'impatto di nuovi agenti terapeutici o fattori ambientali. I ricercatori possono adattare questo metodo per comprendere come diversi fattori influenzano l'attività proteolitica complessiva e la suscettibilità virale.
Aumentando la consapevolezza di come le vie aeree interagiscono con i virus, questa ricerca ha il potenziale di influenzare le raccomandazioni di salute pubblica e le strategie preventive individuali. In questo modo, sottolinea l'importanza di comprendere le complessità del sistema respiratorio e la sua risposta a vari fattori esterni.
Conclusione
In generale, questo studio fa luce sull'intricato equilibrio tra proteasi e antiproteasi all'interno dell'ambiente delle vie aeree. I risultati evidenziano la necessità di continui studi su come queste proteine influenzano la suscettibilità alle infezioni, soprattutto di fronte a sfide ambientali come il fumo e l'inquinamento. Progredendo nella nostra conoscenza in quest'area, possiamo essere meglio preparati a rispondere alle infezioni respiratorie che impattano significamente sulla salute umana.
Titolo: Profiling endogenous airway proteases and antiproteases and measuring proteolytic activation of Influenza HA using in vitro and ex vivo human airway surface liquid samples
Estratto: Imbalance of airway proteases and antiproteases has been implicated in diseases such as COPD and environmental exposures including cigarette smoke and ozone. To initiate infection, endogenous proteases are commandeered by respiratory viruses upon encountering the airway epithelium. The airway proteolytic environment likely contains redundant antiproteases and proteases with diverse catalytic mechanisms, however a proteomic profile of these enzymes and inhibitors in airway samples has not been reported. The objective of this study was to first profile extracellular proteases and antiproteases using human airway epithelial cell cultures and ex vivo nasal epithelial lining fluid (NELF) samples. Secondly, we present an optimized method for probing the proteolytic environment of airway surface liquid samples (in vitro and ex vivo) using fluorogenic peptides modeling the cleavage sites of respiratory viruses. We detected 48 proteases in the apical wash of cultured human nasal epithelial cells (HNECs) (n=6) and 57 in NELF (n=13) samples from healthy human subjects using mass-spectrometry based proteomics. Additionally, we detected 29 and 48 antiproteases in the HNEC apical washes and NELF, respectively. We observed large interindividual variability in rate of cleavage of an Influenza H1 peptide in the ex vivo clinical samples. Since protease and antiprotease levels have been found to be altered in the airways of smokers, we compared proteolytic cleavage in ex vivo nasal lavage samples from male/female smokers and non-smokers. There was a statistically significant increase in proteolysis of Influenza H1 in NLF from male smokers compared to female smokers. Furthermore, we measured cleavage of the S1/S2 site of SARS-CoV, SARS-CoV-2, and SARS-CoV-2 Delta peptides in various airway samples, suggesting the method could be used for other viruses of public health relevance. This assay presents a direct and efficient method of evaluating the proteolytic environment of human airway samples in assessment of therapeutic treatment, exposure, or underlying disease.
Autori: Ilona Jaspers, S. A. Brocke, B. Reidel, C. Ehre, M. E. Rebuli, C. Robinette, K. D. Schichlein, C. A. Brooks
Ultimo aggiornamento: 2024-06-14 00:00:00
Lingua: English
URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.14.599031
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.14.599031.full.pdf
Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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