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Nuovo strumento per studiare le membrane cellulari

Le sonde MemGraft migliorano la visualizzazione e la manipolazione delle membrane cellulari per la ricerca.

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La Membrana plasmatica è una parte super importante di una cellula. Funziona come un confine che separa l'interno della cellula dall'ambiente esterno. Però fa molto di più che semplicemente tenere dentro o fuori le cose. La membrana plasmatica è composta da lipidi e proteine speciali che aiutano la cellula a comunicare, trasportare nutrienti, riconoscere altre cellule e persino muoversi. Data la sua importanza, tanti ricercatori stanno lavorando per creare strumenti che possano aiutare a visualizzare e studiare la membrana plasmatica.

Cosa Sono i Probes Fluorescenti per Membrane?

I probes fluorescenti per membrane sono marcatori speciali che possono illuminarsi quando esposti a condizioni specifiche. Aiutano gli scienziati a vedere la membrana plasmatica al microscopio. Ci sono molti tipi di questi probes. Alcuni sono semplici e marcano solo la membrana, mentre altri possono misurare varie proprietà della membrana, come lo spessore o quanto è fluida. Anche se questi probes sono utili, hanno anche dei limiti.

Le Sfide con i Probes Attuali

La maggior parte dei probes fluorescenti esistenti si attaccano alla membrana plasmatica attraverso interazioni temporanee. Questo può essere un problema perché i probes possono essere lavati via durante gli esperimenti, specialmente quando le cellule vengono trattate per prepararle all'imaging. Quando le cellule vengono fissate o trattate con soluzioni specifiche, la membrana può cambiare, e molti dei probes vengono persi. Questo rende difficile vedere tutto chiaramente.

Inoltre, questi probes possono muoversi rapidamente sulla membrana, il che può ridurre la qualità delle immagini che i ricercatori possono ottenere. Un modo migliore per marcare la membrana plasmatica sarebbe usare probes che formano attaccamenti permanenti alle proteine nella membrana.

Un Nuovo Approccio

I ricercatori hanno trovato un nuovo metodo chiamato “MemGraft”. L'idea è di usare un probe che può legarsi temporaneamente alla membrana plasmatica. Questo legame temporaneo aiuta ad aumentare la concentrazione locale del probe nell'area, rendendo più facile legarlo alle proteine nella membrana. Attaccando il probe alle proteine, i ricercatori possono creare un'etichetta più permanente sulla membrana.

Progettazione dei Probes MemGraft

I probes MemGraft si basano su un tipo di colorante chiamato cianina. Da un lato del colorante c'è una parte che può attaccarsi alla membrana plasmatica, mentre dall'altro lato c'è una sostanza chimica speciale che può reagire con le proteine. Questo design permette ai probes MemGraft di attaccarsi alla membrana plasmatica in modo efficace.

Attraverso i test, è stato scoperto che questi probes funzionano molto meglio delle versioni precedenti. Possono etichettare la superficie cellulare senza essere lavati via e possono anche essere usati in molti tipi di esperimenti.

Testare i Nuovi Probes

Per vedere se i probes MemGraft funzionano davvero, sono stati sottoposti a vari test. Prima, i ricercatori hanno osservato quanto bene i probes etichettassero le membrane plasmatiche di diversi tipi di cellule. I risultati hanno mostrato che i probes MemGraft fornivano segnali chiari, permettendo un'identificazione facile dei contorni delle cellule.

Ulteriori test hanno indicato che i probes rimanevano sulle membrane anche quando mescolati con siero, una sostanza comune nelle colture cellulari. Questo significa che i probes MemGraft potrebbero essere usati per periodi più lunghi e non si laverebbero facilmente.

Confronto con Altri Probes

Rispetto ad altri probes fluorescenti, i MemGraft hanno mostrato un'efficienza molto maggiore. Nei test in cui le cellule sono state trattate con sostanze chimiche che di solito lavano via i probes, i MemGraft sono rimasti saldamente attaccati, mentre altri probes comuni hanno perso la loro efficacia.

Esaminati usando una tecnica speciale di citometria a flusso, i probes MemGraft hanno anche mostrato un'intensità di etichettatura più alta, il che significa che fornivano un segnale più chiaro rispetto ai probes comparabili.

Tracciamento a Lungo Termine e Imaging Multicolore

Uno dei vantaggi significativi dei probes MemGraft è la loro capacità di consentire il tracciamento a lungo termine di cellule vive. I ricercatori sono stati in grado di osservare le cellule per ore senza una perdita significativa nella chiarezza dell'immagine o nella salute delle cellule. Etichettando gruppi diversi di cellule con probes MemGraft di colori diversi, potevano monitorare le interazioni tra questi gruppi senza che i colori si mescolassero.

La flessibilità di questi probes consente ai ricercatori di impostare "codici colore" unici per diverse popolazioni cellulari. Questo può essere molto utile per studiare come diverse cellule interagiscono tra loro nei loro ambienti naturali.

Biotinilazione e Manipolazione Cellulare

Un'altra applicazione interessante della tecnologia MemGraft è la biotinilazione. Attaccando una molecola di biotina a un probe MemGraft, i ricercatori possono etichettare la superficie cellulare. La biotina è una molecola importante che può connettersi a proteine specifiche come la streptavidina. Questa connessione consente ulteriori manipolazioni delle cellule.

Usando i probes MemGraft-biotina, i ricercatori hanno dimostrato come potevano utilizzare perle magnetiche rivestite di streptavidina per separare le cellule biotinilate da quelle non biotinilate. Questa tecnica ha potenziali applicazioni nella selezione e ingegnerizzazione delle cellule, rendendo più facile per gli scienziati studiare diversi tipi di cellule e le loro interazioni.

Il Futuro dei Probes per Membrane

Lo sviluppo dei probes MemGraft rappresenta un passo significativo in avanti nei metodi a disposizione per studiare le membrane cellulari. Creando uno strumento che può etichettare in modo efficace e permanente le membrane plasmatiche, i ricercatori possono ottenere approfondimenti più profondi sul funzionamento e l'interazione delle cellule.

In conclusione, la tecnologia MemGraft apre nuove strade per studiare il mondo complesso delle cellule. Con la capacità di visualizzare e manipolare le membrane cellulari in tempo reale, i ricercatori sono meglio attrezzati per affrontare alcune delle domande più comuni nella biologia cellulare. L'impatto di questi progressi si farà sicuramente sentire in molti campi, tra cui medicina, genetica e biotecnologia. L'esplorazione continua delle capacità dei probes MemGraft continuerà a illuminare i processi fondamentali che governano il comportamento cellulare.

Fonte originale

Titolo: Lipid-directed covalent fluorescent labeling of plasma membranes for long-term imaging, barcoding and manipulation of cells

Estratto: Fluorescent probes for cell plasma membrane (PM) are generally based on amphiphilic anchors that incorporate non-covalently into biomembranes. Therefore, they are not compatible with fixation and permeabilization, presence of serum, or cell co-culture because of their exchange with the medium. Here, we report a concept of lipid-directed covalent labeling of PM, which exploits transient binding to lipid membrane surface generating high local dye concentration, thus favoring covalent ligation to random proximal membrane proteins. This concept yielded a class of fluorescent probes for PM (MemGraft), where a cyanine dye (Cy3 and Cy5) bears at its two ends low-affinity membrane anchor and reactive group: an activated ester or a maleimide. We found that MemGraft probes with these reactive groups provide efficient PM labelling, in contrast to a series of control compounds, including commercial Cy3-based labels of amino and thiol groups, revealing the crucial role of the membrane anchor combined with high reactivity of activated ester and a maleimide groups. In contrast to conventional PM probes, based on non-covalent interactions, MemGraft labelling approach is compatible with cell fixation, permeabilization, trypsinization and presence of serum. The latter allows long-term cell tracking and video imaging of cell PM dynamics without signs of phototoxicity. The covalent strategy also enables staining and long-term tracking of co-cultured cells labelled in different colors without probes exchange. Moreover, combination of different ratios of MemGraft-Cy3 and MemGraft-Cy5 probes enabled long-term cell barcoding in at least 5 color codes, important for tracking and visualizing multiple cells populations. Ultimately, we found that MemGraft strategy enables efficient biotinylation of cell surface, opening the path to cell surface engineering and cell manipulation.

Autori: Andrey S. Klymchenko, N. Aknine, R. Pelletier

Ultimo aggiornamento: 2024-07-28 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.28.605476

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.28.605476.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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