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Approfondimenti microbici sulla conversione della biomassa

Uno studio rivela come A. bescii trasporta zuccheri per la conversione della biomassa.

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Oggi le persone affrontano sfide con l'energia e l'ambiente. Una soluzione è usare la biomassa lignocellulosica, che proviene dalle piante e può essere trasformata in combustibili e sostanze chimiche rinnovabili. Questo tipo di biomassa comprende materiali come legno, paglia e erba. Tuttavia, convertirla in prodotti utili è complicato perché è difficile da scomporre.

Il Ruolo dei Microbi

La natura ha alcuni microbi utili che possono aiutare in questo processo. Tra questi ci sono certi termofili, cioè microbi che vivono in ambienti caldi e possono scomporre materiali vegetali resistenti. Questi microbi possono usare vari zuccheri per energia in modo efficiente. Questa capacità li rende preziosi per aiutare a convertire la biomassa lignocellulosica in combustibili e sostanze chimiche utili come etanolo o acetone.

Anaerocellum bescii

Un microbo notevole è Anaerocellum bescii, che vive a temperature elevate intorno ai 78°C. Questo batterio si distingue perché ha potenti enzimi che scompongono i carboidrati, non limita l'uso degli zuccheri e ha un sistema genetico che permette agli scienziati di modificarlo. Grazie a queste caratteristiche, A. bescii è un buon candidato per convertire la biomassa lignocellulosica in combustibili.

Le ricerche hanno dimostrato che gli scienziati possono modificare geneticamente A. bescii per produrre prodotti preziosi come acetone ed etanolo a livelli adatti per un uso industriale. Tuttavia, la nostra conoscenza su come questo microbo utilizza varie fonti di zucchero è ancora limitata. Capire come A. bescii trasporta gli zuccheri è essenziale per sfruttare completamente il suo potenziale.

Approfondimenti dalla Trascrittomica

Gli scienziati hanno usato la trascrittomica, un metodo che analizza l'attività genica, per studiare il trasporto degli zuccheri in microbi correlati. Alcuni studi hanno esaminato come un batterio simile, C. saccharolyticus, funziona, proponendo modi in cui i suoi trasportatori di zucchero operano. Questi risultati sono stati ampliati in studi focalizzati su A. bescii, offrendo nuove intuizioni sulla sua composizione genetica e utilizzo degli zuccheri.

Trasportatori di Zucchero

In A. bescii e altri microbi simili, il trasporto degli zuccheri dipende da proteine speciali chiamate trasportatori ABC (ATP-Binding Cassette). Questi trasportatori sono composti da una proteina legante il substrato, due proteine che attraversano la membrana cellulare, e una proteina che fornisce energia.

Ci sono due famiglie di trasportatori ABC in questi microbi: CUT1 e CUT2. I trasportatori CUT1 sono progettati per assumere zuccheri più grandi, mentre i trasportatori CUT2 preferiscono zuccheri più piccoli. Entrambi i tipi usano energia dalla scomposizione dell'ATP per trasportare gli zuccheri nella cellula.

La proteina legante il substrato è fondamentale per determinare quali zuccheri possono essere trasportati. Queste proteine possono cambiare forma quando si legano agli zuccheri, migliorando l'efficienza dell'assorbimento. La loro struttura include due parti collegate da una regione flessibile, che consente loro di intrappolare gli zuccheri quando si legano.

L'Importanza della Specificità

Studi sulle proteine leganti il substrato mostrano che quelle che si legano ai malto-oligosaccaridi hanno vari siti per la coordinazione degli zuccheri. Ogni unità di glucosio della maltodestrina può inserirsi in siti specifici all'interno della proteina, influenzando la loro capacità di legame.

In E. coli, un esempio ben studiato di trasporto di zucchero, i ricercatori hanno identificato trasportatori che gestiscono le maltodestrine. Per A. bescii, la comprensione di come funzionano i suoi trasportatori è ancora in fase di sviluppo.

L'Obiettivo dello Studio

Il nostro studio si concentra su due trasportatori ABC in A. bescii che si prevede aiutino a trasportare le maltodestrine. Le proteine leganti il substrato di ciascun trasportatore sono state prodotte in E. coli per ulteriori indagini. Abbiamo usato tecniche come la calorimetria differenziale a scansione (DSC) e la calorimetria di titolazione isoterma (ITC) per esplorare la specificità del substrato di questi trasportatori.

Il metodo DSC aiuta a identificare come gli zuccheri influenzano la stabilità delle proteine, mentre l'ITC misura come le proteine interagiscono con gli zuccheri, fornendo informazioni sulla forza del legame.

Risultati della Ricerca

Specificità del Sottostrato

Attraverso i nostri esperimenti, abbiamo scoperto che i due trasportatori hanno preferenze zuccherine distinte. Il primo, Athe_2310, si lega bene al maltosio e al trealosio, mentre il secondo, Athe_2574, preferisce maltodestrine più grandi.

Negli esperimenti DSC, Athe_2310 ha mostrato la maggiore stabilità termica quando abbinato al maltosio e leggermente meno con il trealosio e il maltotriose. Al contrario, Athe_2574 era più stabile con catene di maltodestrina più lunghe.

Analisi Biofisica

Utilizzando l'ITC, abbiamo misurato quanto bene Athe_2310 si lega a vari zuccheri, scoprendo che ha interazioni forti con zuccheri più piccoli. In confronto, Athe_2574 ha mostrato un'alta affinità per zuccheri più lunghi, in particolare il maltoheptaosio.

Approfondimenti Strutturali

Abbiamo anche esaminato la struttura di queste proteine per capire perché hanno preferenze zuccherine differenti. La nostra analisi ha mostrato che entrambe le proteine hanno strutture simili a quelle di proteine conosciute, ma differiscono nei loro siti di legame, il che impatta sulla loro specificità.

Modellazione Computazionale

Utilizzare modelli computazionali ha aiutato a confermare i nostri risultati sperimentali sul legame degli zuccheri. Abbiamo scoperto che l'energia di legame e l'assetto delle molecole di zucchero nei siti di legame si allineavano con i nostri risultati di laboratorio.

Conclusione

I nostri risultati suggeriscono che A. bescii utilizza due diversi trasportatori ABC per assumere maltodestrine di diverse dimensioni. Athe_2310 trasporta principalmente zuccheri più piccoli, mentre Athe_2574 è progettato per zuccheri più grandi. Questo sistema a doppio uso consente ad A. bescii di cercare efficacemente zuccheri nel suo ambiente naturale, che spesso ha risorse limitate.

Questa ricerca contribuisce a preparare il terreno per ulteriori studi su come i batteri possano essere manipolati per scopi industriali, specialmente nella creazione di combustibili e sostanze chimiche rinnovabili dai materiali vegetali. Comprendere come operano A. bescii e microbi simili può portare a strategie migliori per sfruttare il loro potenziale per affrontare sfide energetiche e ambientali.

Direzioni Future

Andando avanti, è necessaria ulteriore ricerca per esplorare altri sistemi di trasporto di zuccheri in A. bescii e specie correlate. Ottenendo informazioni su questi meccanismi, gli scienziati possono sviluppare metodi per migliorare l'efficienza dei processi di conversione della biomassa, contribuendo a soluzioni energetiche sostenibili.

Comprendere questi processi può anche aiutare a restringere le potenziali modifiche genetiche per ottimizzare l'assunzione di zuccheri e migliorare la produzione complessiva di combustibili e sostanze chimiche preziose dalla biomassa lignocellulosica.

Fonte originale

Titolo: Maltodextrin Transport in the Extremely Thermophilic, Lignocellulose Degrading Bacterium Anaerocellum bescii (f. Caldicellulosiruptor bescii)

Estratto: Sugar transport into microbial cells is a critical, yet understudied step in the conversion of lignocellulosic biomass to metabolic products. Anaerocellum bescii (formerly Caldicellulosiruptor bescii) is an extremely thermophilic, anaerobic bacterium that readily degrades the cellulose and hemicellulose components of lignocellulosic biomass into a diversity of oligosaccharide substrates. Despite significant understanding of how this microorganism degrades lignocellulose, the mechanisms underlying its highly efficient transport of the resulting oligosaccharides into the cell are comparatively underexplored. Here, we identify and characterize the ATP-Binding Cassette (ABC) transporters in A. bescii governing maltodextrin transport. Utilizing past transcriptomic studies on Anaerocellum and Caldicellulosiruptor species, we identify two maltodextrin transporters in A. bescii and express and purify their substrate-binding proteins (Athe_2310 and Athe_2574) for characterization. Using differential scanning calorimetry and isothermal titration calorimetry, we show that Athe_2310 strongly interacts with shorter maltodextrins such as maltose and trehalose with dissociation constants in the micromolar range, while Athe_2574 binds longer maltodextrins, with dissociation constants in the sub-micro molar range. Using a sequence-structure-function comparison approach combined with molecular modeling we provide context for the specificity of each of these substrate-binding proteins. We propose that A. bescii utilizes orthogonal ABC transporters to uptake malto-oligosaccharides of different lengths to maximize transport efficiency. ImportanceHere, we reveal the biophysical and structural basis for oligosaccharide transport by two maltodextrin ABC transporters in A. bescii. This is the first biophysical characterization of carbohydrate uptake in this organism and establishes a workflow for characterizing other oligosaccharide transporters in A. bescii and similar lignocellulosic thermophiles of interest for lignocellulosic bioprocessing. By deciphering the mechanisms underlying high affinity sugar uptake in A. bescii, we shed light on an underexplored step between extracellular lignocellulose degradation and intracellular conversion of sugars to metabolic products. This understanding will expand opportunities for harnessing sugar transport in thermophiles to reshape lignocellulose bioprocessing as part of a renewable bioeconomy.

Autori: Jonathan M Conway, H. Tjo, V. Jiang, J. A. Joseph

Ultimo aggiornamento: 2024-09-14 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.14.613025

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.14.613025.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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