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# La biologia # Biologia sintetica

Il Futuro del Materiale Genetico: XNA

Le XNA offrono nuove possibilità nella ricerca genetica e nella biotecnologia.

Mauricio Lisboa Perez, Michiko Kimoto, Priscilla Rajakumar, Chayaporn Suphavilai, Rafael Peres da Silva, Hui Pen Tan, Nicholas Ting Xun Ong, Hannah Nicholas, Ichiro Hirao, Chew Wei Leong, Niranjan Nagarajan

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Indice

Gli acidi xeno-nucleici sintetici, o XNAs, sono un nuovo tipo di materiale genetico che va oltre i soliti mattoni presenti nel DNA e RNA umano. Mentre il nostro DNA è composto da quattro basi principali (A, T, C e G), gli XNAs includono basi artificiali che non si trovano in natura. Questa espansione offre possibilità interessanti per creare nuove forme di vita e sviluppare tecnologie all’avanguardia.

Immagina un parco giochi dove i bambini possono inventare tutti i tipi di nuovi giochi invece di giocare solo a acchiapparello o nascondino. Gli XNAs sono come quei nuovi giochi, che permettono agli scienziati di pensare al di fuori delle regole tradizionali della biologia.

Le Meraviglie delle Basi Artificiali

Le basi artificiali negli XNAs si comportano in modo diverso rispetto alle solite basi del DNA. Questa proprietà unica aiuta gli scienziati a creare nuovi strumenti e metodi in vari campi, tra cui la biologia sintetica e la biotecnologia. Ad esempio, i ricercatori hanno creato XNAs con basi chiamate P e Z, insieme ad altre come d5SICS e dNaM. Stanno lavorando su queste nuove basi per realizzare macchine piccole, sensori e persino organismi sintetici che un giorno potrebbero aiutare a risolvere grandi problemi in medicina e scienza ambientale.

Se pensi al DNA tradizionale come a un’auto affidabile e vecchio stile, gli XNAs sono più come un cool monopattino elettrico: diversi, più veloci e capaci di andare in posti dove l’auto non può.

Sequenziare gli XNAs Sintetici: Una Nuova Sfida

Per studiare e comprendere gli XNAs, i ricercatori devono sequenziarli, un po’ come un bibliotecario che cataloghi i libri. Tuttavia, il Sequenziamento degli XNAs presenta alcune sfide poiché i metodi attuali sono stati progettati per il DNA tradizionale. Un approccio comune prevede l'uso di metodi come il sequenziamento Sanger, che può fallire nell’identificare le posizioni delle basi artificiali a causa di lacune nei risultati.

Un altro metodo cerca di sostituire le basi artificiali con quelle tradizionali prima del sequenziamento, ma questo può introdurre errori. È come cercare di assemblare un puzzle e rendersi conto che alcuni pezzi provengono da un set diverso; frustrante!

Sequenziamento di Nuova Generazione: Il Futuro è Qui

Gli scienziati sono entusiasti del sequenziamento di nuova generazione perché è molto più veloce rispetto ai metodi precedenti. Ma incontra ancora delle difficoltà con la rilevazione delle basi artificiali. C’è interesse nell’utilizzare tecnologie più nuove che potrebbero sequenziare direttamente gli XNAs senza bisogno di complicate soluzioni. Questi progressi sono come passare da un cellulare a un smartphone: molto più capaci!

Una Scoperta con una Piattaforma di Sequenziamento a Nanopor

Negli sviluppi recenti, i ricercatori sono riusciti a usare una piattaforma di sequenziamento a nanopore per sequenziare direttamente gli XNAs. Questo dispositivo funziona un po’ come un filtro per l’acqua, dove diversi materiali passano e possono essere analizzati. I risultati hanno mostrato che i metodi iniziali possono dare oltre 2 milioni di letture senza problemi notevoli, rendendo chiaro che gli XNAs potrebbero inserirsi perfettamente nelle tecnologie di sequenziamento esistenti.

Pensalo come trovare un nuovo modo per infilare un perno quadrato in un buco rotondo: si scopre che funziona dopo tutto!

Creando una Libreria di XNAs

Per esplorare ulteriormente, i ricercatori hanno progettato una libreria di modelli di XNA, che ha servito come un forziere di sequenze genetiche per i test. Utilizzando diverse combinazioni di basi artificiali e tradizionali, hanno creato una collezione diversificata di XNAs.

Con un approccio intelligente, sono riusciti a generare modelli con fino a 1.024 combinazioni diverse. Questa libreria ha permesso il sequenziamento ad alta capacità e ha aperto la strada a uno sviluppo più efficace delle tecniche di sequenziamento su misura per gli XNAs.

Analizzando i Segnali di Sequenziamento

Quando i ricercatori hanno sequenziato questi XNAs, hanno osservato che i segnali elettrici generati dal sequenziatore a nanopore erano unici, specialmente nei dintorni delle basi artificiali. I modelli nei segnali fornivano indizi su dove si trovassero le basi artificiali, come briciole di pane che guidano gli scienziati su un sentiero attraverso la foresta delle informazioni genetiche.

È importante sottolineare che le letture effettuate vicino a queste basi artificiali mostrano una forte differenza rispetto al DNA di controllo, con segnali che si comportano in modo diverso. Questa differenziazione significa che gli scienziati possono non solo identificare dove si trovano le basi artificiali, ma anche come potrebbero interagire con altro materiale genetico.

Costruendo un Modello di Basecaller

Creare un modello di basecaller è essenziale per interpretare i segnali prodotti durante il sequenziamento. Questo modello funge da traduttore, convertendo segnali elettrici in codici genetici riconoscibili. Il team di ricerca ha sviluppato un modello di deep learning specializzato progettato per gestire sia basi naturali che artificiali.

Pensalo come addestrare un cane a capire sia i comandi “seduto” che “resta”. Dopo alcuni turni di addestramento con esempi diversi, il modello ha raggiunto tassi di successo impressionanti, superando l'80% di accuratezza.

Aumento dei Dati: Potenziando le Prestazioni

I ricercatori hanno capito che era necessario espandere i dati di addestramento per migliorare la capacità generale del modello. Utilizzando tecniche di aumento dei dati, sono riusciti a creare sequenze simulate che riflettevano vari contesti di sequenza.

Questo approccio ha permesso loro di generare letture artificiali che hanno contribuito a potenziare le prestazioni del modello. Proprio come introdurre un nuovo ingrediente in una ricetta può cambiare l'intero piatto, variare gli input dei dati ha aiutato a perfezionare ulteriormente il modello.

Testare il Modello e Risultati

Dopo l'addestramento, il modello è stato testato a lungo sia sulla libreria di prova che sulla collezione di XNA più complessa. I risultati hanno dimostrato un alto livello di accuratezza nell'identificare basi artificiali e naturali nei loro pressi.

Sebbene il modello abbia funzionato bene in generale, ha anche affrontato alcune difficoltà comuni associate all'accuratezza del basecalling, in particolare vicino alle basi artificiali. Ma ha mostrato un’abilità notevole nel processare anche dati impegnativi senza una significativa diminuzione delle prestazioni complessive.

Conclusioni e Direzioni Future

Il successo del sequenziamento diretto degli XNAs rappresenta un passo avanti importante nella ricerca genetica. Con la potenza della tecnologia a nanopore, i ricercatori non vedono l'ora di esplorare altre basi artificiali che potrebbero essere integrate in futuri progetti di biologia sintetica.

Questa esplorazione potrebbe portare a scoperte in molte aree, come lo sviluppo di nuovi farmaci o la creazione di organismi che possono affrontare sfide ambientali. Proprio come l'invenzione della ruota ha cambiato il corso dei viaggi, il sequenziamento degli XNAs ha il potenziale di cambiare la direzione della scienza biologica.

In conclusione, mentre gli scienziati continuano a spingere i confini di ciò che è possibile con gli XNAs, il futuro appare luminoso. L'obiettivo è continuare a trovare soluzioni innovative che possano beneficiare l'umanità e l'ambiente, assicurandosi di divertirsi lungo il cammino-perché che cos'è la scienza senza un po' di eccitazione?

Fonte originale

Titolo: Direct high-throughput deconvolution of unnatural bases via nanopore sequencing and bootstrapped learning

Estratto: The discovery of synthetic xeno-nucleic acids (XNAs) that can basepair as unnatural bases (UBs) to expand the genetic alphabet has spawned interest in many applications, from synthetic biology to DNA storage. However, the inability to read XNAs in a direct, high-throughput manner has been a significant limitation for xenobiology. Here we demonstrate that XNA-containing templates can be directly and robustly sequenced (>2.3 million reads/flowcell, similar to DNA controls) on a MinION sequencer from Oxford Nanopore Technologies to obtain signal data that is significantly distinct from DNA controls (median fold-change >6x). To enable training of machine learning models that deconvolve these signals and basecall XNAs along with natural bases, we developed a framework to synthesize a complex pool of 1,024 UB-containing oligonucleotides with diverse 6-mer sequence contexts and high XNA purity (>90% UB-insertion on average). Bootstrapped models to enable data preparation, and data augmentation with spliced XNA reads to provide high context diversity, enabled learning of a generalizable model to call natural as well as unnatural bases with high accuracy (>80%) and specificity (99%). These results highlight the versatility of nanopore sequencing as a platform for interrogating nucleic acids for xenobiology applications, and the potential to transform the study of genetic material beyond those that use canonical bases.

Autori: Mauricio Lisboa Perez, Michiko Kimoto, Priscilla Rajakumar, Chayaporn Suphavilai, Rafael Peres da Silva, Hui Pen Tan, Nicholas Ting Xun Ong, Hannah Nicholas, Ichiro Hirao, Chew Wei Leong, Niranjan Nagarajan

Ultimo aggiornamento: 2024-12-02 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.02.625113

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.02.625113.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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