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# Biologie# Biologie végétale

Avancées dans le génie génétique de l'hévéa

La recherche explore des techniques CRISPR pour améliorer les rendements et la qualité des plants de caoutchouc.

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Les hévéas, connus scientifiquement sous le nom de Hevea brasiliensis, sont super importants pour produire du caoutchouc naturel utilisé dans plein d'industries. Avec la demande en caoutchouc naturel qui explose dans le monde entier, il faut améliorer les rendements des hévéas et la qualité du caoutchouc fabriqué. C'est essentiel pour répondre aux divers besoins des différents marchés, y compris ceux de l'industrie et de la défense.

Défis dans la culture des hévéas

Les hévéas sont des plantes pérennes qui mettent généralement 5-6 ans à commencer à fleurir et à produire des graines. Cette attente peut être un gros obstacle pour les agriculteurs et l'industrie du caoutchouc. En plus, les hévéas ont une génétique complexe, ce qui fait que leurs taux de floraison et leur production de graines peuvent varier énormément selon les conditions environnementales. Dans des endroits comme la Chine, ces défis peuvent être encore plus marqués, ce qui affecte la productivité globale de la culture des hévéas.

Actuellement, les nouvelles variétés d'hévéas sont surtout développées par des techniques de croisement entre deux plants parents. Cependant, cette méthode donne souvent des descendants avec des traits indésirables, limitant le potentiel pour une plantation à grande échelle de nouvelles variétés. La plupart des plants parents utilisés pour le croisement viennent d'un pool génétique limité, ce qui réduit la diversité génétique nécessaire pour améliorer efficacement les rendements des hévéas.

À cause de ces défis, la sélection des hévéas n'a pas beaucoup avancé ces dernières décennies. Cette stagnation a conduit à un besoin pressant de techniques innovantes, y compris l'ingénierie génétique, pour créer de nouvelles variétés d'hévéas plus rapidement que les méthodes traditionnelles.

La promesse de l'ingénierie génétique

Une des techniques les plus prometteuses en ingénierie génétique est CRISPR/Cas9. Cette technologie permet aux scientifiques de modifier le matériel génétique des plantes pour améliorer des traits souhaitables ou supprimer ceux qui sont indésirables. Bien que CRISPR ait déjà été utilisé avec succès sur de nombreuses autres espèces de plantes, la recherche sur les hévéas a pris du retard. Des tentatives précédentes d'appliquer CRISPR aux hévéas ont eu un succès limité, surtout en raison de difficultés à transformer les cellules de l'arbre.

Le principal obstacle à un editing génétique efficace chez les hévéas a été le système de transformation immature. Historiquement, les scientifiques ont utilisé la transformation médiée par Agrobacterium, qui consiste à introduire de nouveaux gènes dans les cellules de la plante. Bien que certaines plantules d'hévéas aient été produites avec cette technique, les taux de réussite ont été bas en raison de divers facteurs, y compris des conditions de croissance sous-optimales pour les cellules.

Récemment, les scientifiques se sont tournés vers les Embryons somatiques comme une option plus efficace pour la transformation. Les embryons somatiques sont un type de cellule végétale qui peut se développer en une plante complète sans passer par le processus typique de formation de graines. Ils ont montré un potentiel pour une meilleure efficacité de transformation.

Améliorer les techniques de transformation

Pour améliorer les taux de transformation des cellules d'hévéas, les chercheurs ont travaillé à optimiser divers facteurs, y compris le choix des antibiotiques utilisés pour sélectionner les cellules transformées. Les antibiotiques sont cruciaux pour identifier les cellules qui ont réussi à incorporer le nouveau matériel génétique. Des études précédentes indiquaient que la kanamycine était couramment utilisée, mais qu'elle avait des effets néfastes sur la croissance des embryons somatiques.

Dans cette étude, les scientifiques ont testé différents antibiotiques et ont trouvé que l'hygromycine était le meilleur choix. En mettant en place une stratégie de sélection continue utilisant l'hygromycine, ils ont réussi à obtenir un meilleur équilibre entre les cellules transformées tout en soutenant leur croissance et leur développement.

Génération de plantules d'hévéas modifiées

Les chercheurs ont réussi à induire des embryons qui avaient pris le gène modifié. Ils ont découpé ces embryons en plus petites sections et les ont soumis à un autre tour d'embryogenèse. Ce processus a permis de produire de nombreux nouveaux embryons qui montraient des signes de modification génétique réussie.

Un total de 33 nouvelles générations d'embryons ont été produites, et des tests génétiques ultérieurs ont confirmé que presque la moitié d'entre eux étaient homozygotes, ce qui signifie qu'ils avaient deux copies identiques du gène modifié. C'était une amélioration significative par rapport aux tentatives précédentes.

Obtenir des traits visibles chez les hévéas

À partir des embryons modifiés, plusieurs plantules ont été régénérées. Parmi celles-ci, certaines présentaient des traits uniques. Notamment, certaines plantes avaient un phénotype albinos, indiquant une modification réussie du gène responsable de la production de chlorophylle. En séquençant les génomes de ces plantes, les chercheurs ont confirmé que la modification génétique avait entraîné des mutations homozygotes.

La recherche a non seulement montré la capacité de produire des hévéas génétiquement modifiés mais a aussi souligné le potentiel de ces plantes modifiées à transmettre leurs traits à la génération suivante sans modifications supplémentaires.

Défis et orientations futures

Bien que l'étude ait obtenu des résultats impressionnants, des défis persistent. Par exemple, beaucoup des embryons initialement transformés étaient chimériques, ce qui signifie qu'ils étaient composés d'un mélange de cellules modifiées et non modifiées. Cette complexité rend difficile l'identification des plantes totalement transformées.

L'équipe de recherche a noté que, bien qu'une forte proportion d'insertion de T-DNA ait été observée, la plupart n'ont pas donné les modifications souhaitées dans les gènes. Cela a mis en évidence la nécessité de poursuivre l'optimisation des vecteurs de modification génétique utilisés et des conditions dans lesquelles les Transformations se produisent.

Pour résoudre ces problèmes, les chercheurs prévoient de modifier les vecteurs génétiques utilisés dans de futures expériences. Ils visent à remplacer les promoteurs actuels des gènes modifiés par des promoteurs plus forts et plus efficaces qui ont montré des promesses dans d'autres espèces de plantes. En apportant ces ajustements, ils s'attendent à voir une meilleure efficacité de modification et un plus grand nombre de plantules stables et homozygotes.

Conclusion

Cette étude représente un pas en avant significatif dans l'amélioration de la sélection des hévéas grâce à l'ingénierie génétique. En optimisant les techniques de transformation et en démontrant la génération réussie de plantules modifiées, les chercheurs ont ouvert la voie à l'utilisation future de la technologie CRISPR dans l'amélioration génétique des hévéas. À mesure que l'équipe continue à peaufiner ses méthodes, le potentiel d'accélérer la culture des hévéas et d'améliorer la production de caoutchouc devient plus réalisable. Si ça réussit, ces avancées pourraient répondre à la demande mondiale croissante en caoutchouc naturel tout en améliorant la qualité et les traits des hévéas utilisés dans la production.

Source originale

Titre: An optimized somatic embryo transformation system assisted homozygous edited rubber tree generation method mediated by CRISPR/Cas9

Résumé: Previously, we have realized the CRISPR/Cas9-RNP and plasmid mediated protoplast transient transformation genome editing in the rubber tree (Hevea brasiliensis), but no gene editing plants were acquired due to the bottleneck of genetic transformation. In present study, antibiotic sensitivity tests against kanamycin, hygromycin and basta were analyzed for embryo screening, the results demonstrated that 10 mg/L hygromycin is the best for transformation. Then Agrobacterium mediated transformation of H. brasiliensis embryos was carried out using a pCAMBIA1300-based CRISPR/Cas9 vector targeting Phytoene desaturase gene (HbPDS). High-throughput sequencing of T0 generation positive embryos which were used as regeneration materials in typical transformation procedure showed that more than 90% T0 edited embryos are chimeric with a 3.2% editing efficiency. A T0 embryo with 9.8% edited cells was sliced into small pieces for one more cycle embryogenesis to produce T1 generation embryos in order to improve the ratio of homozygous embryos. Subsequently, next-generation sequencing (NGS) demonstrated that 29 out of 33 T1 embryos were edited, nearly 50% of which were found homozygous. At last, besides four chimeric plantlets with partial albino leaves, four plantlets with complete albino phenotype were regenerated from the 29 T1 generation edited embryos, among which one is a homozygous mono-allelic mutant and the other three are homozygous bi-allelic mutants. NGS demonstrated that the threshold for the proportion of edited cells with expected albino phenotype is between 70-85%. Additionally, Tail-PCR indicate that the T-DNA was inserted into different genome positions in the four homozygous edited plantlets, combined with the different genotypes are considered, the four homozygous plantlets can be confirmed as independently derived from single transformed cells. Overall, this is the first edited rubber trees with expected phenotype reported publicly, which shows the potential in genetic improvement of H. brasiliensis by CRISPR/Cas9 gene editing, and subculture of T0 positive transformed somatic embryos into T1 generation is proved to be an effective and necessary procedure to produce homozygous transgenic plantlets. This study presents a significant advancement in transgenic and gene editing for rubber tree.

Auteurs: Tiandai Huang, X. Yang, Q. Lin, J. Udayabhanu, Y. Hua, X. Dai, S. Xin, X. Wang

Dernière mise à jour: 2024-03-29 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.14.585007

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.03.14.585007.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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