Avanços em Metagenômica Funcional e Pesquisa do Microbioma
Novos métodos melhoram o estudo dos microbiomas usando DNA mínimo.
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Índice
- A Importância do Sequenciamento de DNA
- O que é Metagenômica Funcional?
- Passos para Criar uma Biblioteca Metagenômica Funcional
- Novo Método: METa Assembly
- Preparando uma Biblioteca de Inserção Pequena
- Aplicações da Metagenômica Funcional
- Experimentos Bem-Sucedidos com METa Assembly
- Testes para Resistência a Antibióticos
- Estudo do Metabolismo de Acarbose
- Resumo dos Resultados
- Direções Futuras na Pesquisa de Microbiomas
- Conclusão
- Fonte original
- Ligações de referência
Microbiomas são grupos de coisinhas minúsculas, como bactérias, fungos e vírus, que vivem em ambientes como nossos corpos e no solo. Esses organismos pequenos desempenham papéis importantes na saúde e no ecossistema, e têm várias características genéticas diferentes. Mas a maioria deles é difícil de cultivar em laboratórios, o que torna complicado estudá-los diretamente. Os pesquisadores costumam usar um método chamado metagenômica para analisar o DNA dessas comunidades.
Sequenciamento de DNA
A Importância doO sequenciamento de DNA em alta velocidade permite que os cientistas leiam o material genético dos microbiomas. Isso ajuda a entender os tipos de organismos presentes em um microbioma específico e o que eles podem estar fazendo. Apesar dos avanços nas técnicas de sequenciamento, os pesquisadores ainda têm dificuldade em identificar e entender muitos genes novos encontrados nesses organismos pequenos. Um método proposto para melhorar a descoberta de genes é a metagenômica funcional, que não exige o cultivo de bactérias em laboratórios.
O que é Metagenômica Funcional?
Metagenômica funcional envolve a criação de bibliotecas de fragmentos de DNA dos microbiomas e a inserção desses fragmentos em organismos hospedeiros. Isso permite que os genes sejam expressos, e os pesquisadores podem então procurar características ou funções específicas desses genes. O objetivo é encontrar novos genes que façam coisas interessantes, como quebrar substâncias ou oferecer Resistência a Antibióticos.
Passos para Criar uma Biblioteca Metagenômica Funcional
- Extrair DNA: Primeiro, os cientistas extraem DNA do microbioma.
- Fragmentar o DNA: O DNA é quebrado em pedaços menores.
- Clonar o DNA: Esses pedaços são inseridos em vetores, que podem transportá-los para células hospedeiras.
- Transformar Células Hospedeiras: As células hospedeiras absorvem os vetores contendo os fragmentos de DNA.
- Selecionar Características: Os pesquisadores então procuram características específicas nas células hospedeiras que expressam os fragmentos de DNA.
- Analisar Resultados: Eles coletam e analisam os fragmentos para identificar os genes de interesse.
Novo Método: METa Assembly
Recentemente, um novo processo chamado METa assembly foi desenvolvido para criar bibliotecas Metagenômicas funcionais usando menos DNA do que antes. Esse método simplifica os passos envolvidos na preparação dessas bibliotecas, o que abriu a possibilidade de estudar microbiomas que antes eram muito difíceis de analisar, como os de ambientes com baixa Biomassa ou amostras pequenas.
Preparando uma Biblioteca de Inserção Pequena
Com o método METa assembly, os pesquisadores podem preparar bibliotecas usando quantidades bem pequenas de DNA, até 50 ng. Isso significa que agora eles podem trabalhar com amostras que antes não seriam viáveis. Os pesquisadores testaram esse método em amostras de várias fontes, incluindo fezes de animais e amostras ambientais, e acharam eficaz na criação de bibliotecas metagenômicas funcionais que eram grandes e ricas em informações.
Aplicações da Metagenômica Funcional
A metagenômica funcional pode ser aplicada em várias áreas, como medicina, agricultura e ciência ambiental. Por exemplo, os pesquisadores podem usá-la para encontrar novos genes relacionados à resistência a antibióticos ou para descobrir novas enzimas que podem quebrar poluentes ou aumentar a produção de alimentos. A capacidade de estudar microbiomas de baixa biomassa oferece novas oportunidades para descobrir características valiosas na genética microbiana.
Experimentos Bem-Sucedidos com METa Assembly
Nos seus estudos, os pesquisadores demonstraram a eficácia do método METa assembly criando com sucesso bibliotecas metagenômicas funcionais a partir de amostras com baixa entrada. Eles extraíram DNA de uma amostra fecal e de uma amostra de um aquário, ambas com quantidades muito baixas de DNA. Usando o método METa assembly, criaram bibliotecas funcionais que continham genes interessantes relacionados à resistência a antibióticos e outras funções.
Testes para Resistência a Antibióticos
Como parte de seus experimentos, os pesquisadores procuraram bactérias que podiam resistir a antibióticos. Eles focaram em antibióticos específicos, como tetraciclina, para ver se os genes que capturaram poderiam fornecer resistência. Eles identificaram várias cepas de bactérias que mostraram resistência significativa, que depois foram sequenciadas para entender melhor a sua composição. Esse trabalho destaca como a metagenômica funcional pode revelar novos mecanismos de resistência em bactérias.
Estudo do Metabolismo de Acarbose
Outro estudo focou no microbioma intestinal humano e sua capacidade de processar um medicamento chamado acarbose, que é usado para tratar diabetes. Os pesquisadores queriam ver se conseguiam identificar genes envolvidos na modificação da acarbose. Usando as bibliotecas que desenvolveram, conseguiram isolar dois genes significativos que pareciam ter papéis no metabolismo da acarbose. Essas descobertas poderiam levar a novas ideias sobre como os microbiomas intestinais interagem com medicamentos.
Resumo dos Resultados
Os resultados desses estudos mostram que a metagenômica funcional, especialmente com o novo método METa assembly, pode ser uma ferramenta poderosa para estudar microbiomas. Ela permite que os pesquisadores trabalhem com amostras de DNA menores enquanto ainda extraem altos níveis de informações genéticas. Isso pode levar a novas descobertas em várias áreas, da saúde à ciência ambiental.
Direções Futuras na Pesquisa de Microbiomas
Dadas as limitações dos métodos atuais, os pesquisadores estão otimistas sobre o potencial da metagenômica funcional para preencher lacunas na nossa compreensão da genética microbiana. À medida que a capacidade de criar essas bibliotecas melhora, espera-se que muitos mais microrganismos valiosos sejam estudados. O funcionamento saudável dos ecossistemas e a saúde humana dependem profundamente de uma melhor compreensão dos microbiomas, tornando essa área de pesquisa crucial para os avanços científicos futuros.
Conclusão
Em conclusão, os avanços na metagenômica funcional e no método METa assembly representam um progresso significativo na pesquisa de microbiomas. Ao permitir que os cientistas trabalhem com quantidades limitadas de DNA, esse método abre novas avenidas para descobertas. À medida que os pesquisadores continuam a desvendar os segredos dos microbiomas, podemos esperar ver aplicações benéficas que podem melhorar a saúde, a agricultura e a nossa compreensão dos ecossistemas em uma escala global.
Título: Functional metagenomic discovery of novel tetracycline and acarbose resistance genes from low biomass samples using METa assembly
Resumo: A significant challenge in the field of microbiology is the functional annotation of sequence novel genes from microbiomes. The increasing pace of sequencing technology development has made solving this challenge in a high-throughput manner even more important. Functional metagenomics offer a sequence-naive and cultivation-independent solution. This forward genetics approach relies on the creation of functional metagenomic libraries (aka shotgun cloning) in which a microbial host such as E. coli is transformed with vectors containing metagenomic DNA fragments and, optimally, expresses any captured genes into a corresponding phenotype. These libraries can be screened or selected for a function of interest, such as antibiotic resistance, allowing the captured metagenomic DNA to be linked to a phenotype regardless of the sequences novelty. Unfortunately, most methods for constructing functional metagenomic libraries require large input masses of metagenomic DNA, putting many sample types off limits to this toolset. Here, we show that our recently developed functional metagenomic library preparation method, METa assembly, can be used to prepare useful libraries from much lower input DNA masses. Standard methods of functional metagenomic library preparation generally call for 5 g to 60 g of input metagenomic DNA. Here, we demonstrate that the threshold for input DNA mass can be lowered at least to 30.5 ng, a three-log decrease from prior art. These functional metagenomic libraries, prepared using between 30.5 ng and 100 ng of metagenomic DNA, nonetheless were sufficient to link three MFS efflux pumps to tetracycline resistance and capture two potential genes for degradation or resistance to the antidiabetic pharmaceutical acarbose. Our preparation of functional metagenomic libraries from aquatic samples and a model fecal swab demonstrate that METa assembly can be used to prepare functional metagenomic libraries from microbiomes that were previously incompatible with this approach. Functional metagenomic screens and selections are one of the few high-throughput methods that can link novel genes to functions and here we show that one of their significant drawbacks, a requirement for large amounts of metagenomic DNA, can now be overcome.
Autores: Terence S Crofts, H. M. Allman, E. P. Bernate, E. Franck, F. J. Oliaro, E. M. Hartmann
Última atualização: 2024-06-29 00:00:00
Idioma: English
Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.29.601325
Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.29.601325.full.pdf
Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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