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O Papel dos Adipócitos no Metabolismo Energético

Descubra como os adipócitos influenciam o armazenamento de energia e a saúde metabólica.

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Adipócitos, conhecidos popularmente como células de gordura, são essenciais para o metabolismo de energia no nosso corpo. Tem dois tipos principais de adipócitos: Adipócitos Brancos e Adipócitos Marrons. Os adipócitos brancos são responsáveis por armazenar energia na forma de gordura em uma única gota grande. Já os adipócitos marrons têm muitas gotas de gordura menores e uma quantidade alta de Mitocôndrias, que são as usinas de energia das células. Essa estrutura única permite que os adipócitos marrons gerem calor sem tremores, o que é importante para manter o corpo aquecido.

O tecido adiposo marrom (BAT) é crucial para queimar energia e gerar calor, especialmente em resposta a temperaturas frias ou quando consumimos muitas calorias. Pesquisadores descobriram recentemente gordura marrom em humanos adultos, chamando atenção para ela como um alvo potencial para controlar o balanço energético e tratar condições metabólicas como obesidade e diabetes.

O Papel dos Adipócitos no Corpo

Os adipócitos fazem mais do que armazenar gordura; eles também liberam substâncias chamadas citocinas, ou adipocinas. Ambos os tipos de adipócitos produzem citocinas comuns como adiponectina e IL-6, mas também produzem algumas únicas. Por exemplo, os adipócitos brancos liberam leptina, que ajuda a regular o apetite e o uso de energia, enquanto os adipócitos marrons liberam norepinefrina, que contribui para a queima de energia.

As citocinas influenciam vários sinais químicos no corpo, afetando nossas respostas imunológicas e levando à inflamação. Isso destaca que o tecido adiposo não é só um depósito passivo de gordura, mas um participante ativo nas nossas funções imunológicas e processos metabólicos.

Envelhecimento e Adipócitos

À medida que envelhecemos, as funções dos adipócitos marrons declinam. Isso diminui nossas taxas metabólicas, facilitando o ganho de peso e dificultando o controle dos níveis de açúcar no sangue. Os adipócitos brancos antigos tendem a produzir mais citocinas inflamatórias, levando a uma inflamação crônica de baixo grau, que está ligada a várias doenças relacionadas à idade, incluindo doenças cardíacas e alguns tipos de câncer.

A Importância dos Preadipócitos

Para estudar mais sobre adipócitos, os cientistas desenvolveram um método para criar linhagens celulares a partir de preadipócitos marrons e brancos de camundongos. Essas células são obtidas de camundongos jovens e mais velhos e podem ajudar a entender como os adipócitos se comportam sob diferentes condições.

Criando Retrovírus para Imortalização

Para trabalhar com essas células em laboratório, os pesquisadores precisam primeiro produzir um vírus especial que permita que os preadipócitos cresçam indefinidamente. Esse processo envolve usar tipos específicos de células (HEK-293T) e misturá-los com várias substâncias para incentivar a produção do vírus. Após alguns dias, os pesquisadores coletam o vírus para ser usado na infecção dos preadipócitos.

Isolamento e Cultivo de Preadipócitos

Os preadipócitos são isolados de tecidos adiposos em camundongos recém-nascidos e adultos. Isso envolve anestesiar os camundongos, remover cuidadosamente os tecidos adiposos e depois cortá-los em pedaços pequenos para digestão. O processo de digestão, que usa uma enzima especial, separa as células individuais do tecido adiposo, permitindo que elas cresçam em condições de laboratório.

Durante a fase de cultura celular, as células recebem um meio rico em nutrientes que apoia seu crescimento. O meio pode ser ajustado para atender às necessidades específicas das células à medida que crescem.

Imortalizando Preadipócitos

Para criar linhagens celulares que possam crescer indefinidamente, os preadipócitos isolados são tratados com o retrovírus produzido anteriormente. Isso permite que as células expressem certos genes que as impedem de envelhecer. Os pesquisadores usam uma substância chamada polibreno para ajudar o vírus a infectar as células de maneira mais eficaz.

Após a infecção, as células são deixadas para crescer em um meio regular por alguns dias. Então, elas são tratadas com antibióticos para eliminar células que não conseguiram absorver o vírus. Esse processo de seleção dura cerca de uma semana, após o qual as células sobreviventes podem ser cultivadas sem pressão de seleção.

Diferenciação de Preadipócitos

Uma vez que os preadipócitos estão estabelecidos e estáveis, o próximo passo é incentivá-los a amadurecer em adipócitos funcionais. Isso é feito usando meios específicos que contêm vários componentes como insulina e dexametasona, que promovem a conversão de preadipócitos em adipócitos maduros.

Para a diferenciação de adipócitos marrons, o meio de indução inclui componentes adicionais como IBMX e T3, que estimulam o metabolismo energético e a termogênese. Os adipócitos brancos têm uma composição ligeiramente diferente, mas compartilham alguns dos mesmos ingredientes.

Identificando Adipócitos Diferenciados

Após a diferenciação, os pesquisadores observam as células sob um microscópio. Preadipócitos jovens costumam ter uma forma semelhante a um fuso antes de se tornarem células redondas durante a diferenciação. Adipócitos maduros mostram muitas gotas de gordura quando vistos através de um microscópio.

Vários métodos são usados para confirmar a diferenciação bem-sucedida dos adipócitos. Técnicas de coloração ajudam a visualizar as gotas de lipídios e os núcleos das células. Vários marcadores podem ser detectados usando ensaios específicos, indicando que as células se tornaram adipócitos marrons ou brancos.

A Importância das Mitocôndrias

As mitocôndrias desempenham um papel importante nos adipócitos marrons, já que essas organelas estão envolvidas na conversão de gordura armazenada em energia utilizável. Coloração das células com corantes específicos para mitocôndrias ajuda os pesquisadores a avaliar sua saúde e função. Adipócitos jovens tendem a ter mitocôndrias mais saudáveis em comparação com adipócitos mais velhos, que geralmente apresentam danos estruturais.

Avaliando o Envelhecimento Celular

Com o envelhecimento, os adipócitos mostram sinais de deterioração. As mudanças podem incluir núcleos aumentados e estrutura mitocondrial alterada. Os pesquisadores usam essas mudanças físicas como marcadores para estudar o envelhecimento celular, o que pode levar a insights sobre o impacto geral do envelhecimento no metabolismo e na saúde.

Conclusão

O estudo dos adipócitos e suas funções é essencial para entender o metabolismo energético e sua conexão com várias condições de saúde. Através de métodos como imortalização, diferenciação e avaliação, os pesquisadores podem explorar como essas células funcionam, como mudam com a idade e como podem ser alvo para tratar distúrbios metabólicos. A pesquisa em andamento nesse campo promete desenvolver estratégias para melhorar a saúde metabólica e lidar com doenças relacionadas à obesidade e ao envelhecimento.

Fonte original

Título: Establishing immortalized brown and white preadipocyte cell lines from young and aged mice

Resumo: Studying adipogenesis and adipocyte biology requires the isolation of primary preadipocytes from adipose tissues. However, primary preadipocytes have a limited lifespan, can only undergo a finite number of divisions, and often lose their original biological characteristics before becoming senescent. The repeated isolation of fresh preadipocytes, particularly from young pups or aged animals, is costly and time-consuming. Immortalization of these cells offers a solution by overcoming cellular senescence and maintaining proliferative capacity, allowing for long-term studies without the continuous need to isolate new cells from animals. Immortalized cell lines thus provide a consistent and reproducible experimental model, significantly reducing variability across different animals. However, successfully establishing immortalized preadipocyte cell lines presents challenges, including selecting appropriate adipose tissue depots, isolating primary preadipocytes, and choosing an effective immortalization strategy. In this study, we present optimized protocols and share first-hand experiences establishing immortalized brown and white preadipocyte cell lines from young and aging mice. These protocols offer a valuable resource for researchers studying adipogenesis, metabolism, and adipocyte biology. Support Protocol 1: Retrovirus production Basic Protocol 1: Isolation and culture of primary brown and white preadipocytes from mouse interscapular brown adipose tissue (iBAT) and subcutaneous white adipose tissue (sWAT) in the same region Basic Protocol 2: Immortalization of mouse brown and white preadipocytes Basic Protocol 3: Selection of immortalized preadipocytes Basic Protocol 4: Selection of single-cell clones of immortalized preadipocytes Support Protocol 2: Cryopreservation of immortalized preadipocytes Support Protocol 3: Wake up and culture of immortalized preadipocytes Support Protocol 4: Subculture and expansion of immortalized preadipocytes Basic Protocol 5: Differentiation of immortalized mouse brown and white preadipocytes Support Protocol 5: Lipid droplet staining and nucleus counterstaining Support Protocol 6: Mitochondria staining and nucleus counterstaining

Autores: Sui Seng Tee, X. Wu, S. Elsaid, F. Levet, W. Li

Última atualização: 2024-10-11 00:00:00

Idioma: English

Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.10.617572

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.10.10.617572.full.pdf

Licença: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Alterações: Este resumo foi elaborado com a assistência da AI e pode conter imprecisões. Para obter informações exactas, consulte os documentos originais ligados aqui.

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