Simple Science

Ciência de ponta explicada de forma simples

# Biologia # Bioengenharia

Revolucionando a Pesquisa: Streptomyces e Automação

Descubra como a automação transforma a pesquisa com Streptomyces para resultados melhores.

Tenna Alexiadis Møller, Thom Booth, Simon Shaw, Vilhelm Krarup Møller, Rasmus J.N. Frandsen, Tilmann Weber

― 9 min ler


Streptomyces e Robôs se Streptomyces e Robôs se Unem pesquisa com Streptomyces. A automação aumenta a eficiência na
Índice

Streptomyces são bactérias super interessantes que fizeram contribuições importantes em várias áreas, especialmente em medicina e agricultura. Elas são mais conhecidas por produzir antibióticos, que são substâncias que ajudam a combater infecções causadas por bactérias nocivas. Dá pra dizer que esses carinhas são como pequenos super-heróis, salvando o dia uma infecção de cada vez!

Essas bactérias também produzem agentes agrícolas e enzimas. Os agentes agrícolas ajudam as plantas a crescer melhor e afastam pragas, enquanto as enzimas são proteínas que aceleram reações químicas em organismos vivos. Pense nas enzimas como os trabalhadores que mantêm tudo funcionando direitinho.

O Que São Sequenciamento de Próxima Geração e Ferramentas Genéticas?

Graças aos avanços na tecnologia, os cientistas desenvolveram maneiras de ler todo o material genético de organismos, incluindo os Streptomyces. Esse processo é chamado de sequenciamento de próxima geração. É como ler um livro de receitas bem complicado que ensina como fazer cada prato de um restaurante, só que com genes em vez de receitas.

Com mais genomas disponíveis para estudar, os pesquisadores começaram a explorar as muitas capacidades ocultas dos Streptomyces. Esse novo conhecimento motivou os cientistas a criar ferramentas que ajudam a modificar essas bactérias para aumentar sua utilidade.

Um desenvolvimento empolgante é a tecnologia CRISPR. CRISPR é um método que permite que os cientistas façam mudanças precisas no DNA de um organismo. Pense nisso como usar um editor de texto para editar um documento, onde você pode adicionar, excluir ou mudar palavras conforme precisar. Essa ferramenta facilitou muito a modificação dos Streptomyces e melhorou sua capacidade de produzir substâncias valiosas.

O Desafio das Eficiências de Transformação

Apesar dos avanços tecnológicos, ainda existem desafios ao usar Streptomyces na pesquisa e na indústria. Um grande obstáculo é que inserir DNA nessas bactérias pode ser complicado. Esse processo é conhecido como transformação, e a eficiência da transformação muitas vezes varia, especialmente ao trabalhar com cepas não testadas.

Para facilitar a transformação, os pesquisadores costumam usar um método chamado conjugação intergênica, que envolve misturar Streptomyces com outra bactéria chamada E. Coli. As cepas de E. coli têm um talento especial para aceitar e transferir DNA, tornando-as parceiras confiáveis nesse processo.

No entanto, aplicar esse método em grande escala-pensando em milhares de cepas-pode ser um trabalho bem intenso, consumindo muito tempo e recursos. Isso torna a demanda por técnicas mais eficientes e escaláveis bem significativa.

Entram os Robôs

Para enfrentar esses desafios, os cientistas começaram a usar Automação e robótica. Plataformas automáticas de manuseio de líquidos podem realizar tarefas como pipetagem, mistura e transferência de amostras, tudo sem mãos humanas. Imagine robôs fazendo o trabalho pesado enquanto os pesquisadores tomam café e curtem a vista-parece um sonho, né?

Esses sistemas robóticos vêm em várias formas. Alguns são dispositivos tudo-em-um, ou seja, podem fazer tudo em uma configuração só. Outros são modulares, permitindo aos usuários misturar e combinar componentes conforme suas necessidades. Enquanto sistemas robóticos grandes podem oferecer uma taxa de processamento impressionante, eles geralmente vêm com um preço bem alto e precisam de operadores habilidosos. A flexibilidade aqui é importante, especialmente para laboratórios de pesquisa menores e start-ups que não têm os mesmos recursos.

Os Gargalos na Automação

Quando se trata de implementar sistemas robóticos, existem cinco grandes desafios, ou gargalos, que os pesquisadores precisam superar:

  1. Custo: Muitas dessas configurações robóticas são caras, o que dificulta a vida de laboratórios menores que querem investir nelas. Uma solução flexível que se encaixe no orçamento é sempre mais desejável.

  2. Habilidades de Programação: A maioria dos cientistas não é treinada como programadores de computador, o que pode complicar o processo de automação de protocolos. É como pedir a alguém que cozinha por diversão para de repente se tornar um chef estrelado!

  3. Transferência de Conhecimento: Quando os projetos terminam, conhecimentos valiosos podem ser perdidos se não houver uma documentação adequada para futuros usuários. A alta rotatividade de funcionários pode piorar essa situação, levando à perda do know-how.

  4. Padronização: Muitos laboratórios podem não seguir procedimentos padronizados de forma consistente, o que pode dificultar a replicação de experimentos e a comparação de resultados.

  5. Variabilidade de Protocolos: Os cientistas costumam adaptar protocolos ao longo do tempo, levando a inconsistências. Isso pode dificultar os esforços para simplificar a automação, já que fica complicado decidir qual versão de um protocolo seguir.

Sistemas Modulares: Uma Solução Flexível

Diante desses desafios, sistemas modulares como o Opentrons ganharam popularidade. Essas plataformas são acessíveis e adaptáveis, permitindo que os pesquisadores personalizem suas configurações robóticas sem precisar de muito conhecimento em programação. Pense nisso como um conjunto LEGO para a ciência!

O robô Opentrons é alimentado por computadores Raspberry Pi e usa scripts simples em Python para controlar suas ações. Essa configuração não só reduz custos, mas também incentiva os usuários a projetarem seus próprios módulos e protocolos.

Embora existam fluxos de trabalho automatizados para E. coli, não muitos foram desenvolvidos para Streptomyces. Algumas pesquisas mostraram sucesso ao usar automação para prever e priorizar clusters de genes bacterianos e cloná-los para estudos adicionais.

A Necessidade de Comunicação Aberta

Um aspecto importante do desenvolvimento desses fluxos de trabalho é a troca de informações e a promoção da colaboração. A transparência é essencial, permitindo que pesquisadores de diferentes áreas trabalhem juntos de forma eficaz. Ao fomentar um ambiente de comunicação aberta, os pesquisadores podem construir um recurso compartilhado de configurações acessíveis e personalizáveis, economizando tempo e dinheiro para todos os envolvidos.

Entram a Programação Literária

Outro desenvolvimento empolgante nessa área é a programação literária. Essa abordagem permite que os pesquisadores escrevam códigos que sejam fáceis de entender, combinando descrições em linguagem natural com o código em si. É como montar uma receita onde as instruções são tão claras que qualquer um pode seguir, mesmo que não seja um expert na cozinha!

Isso pode ser especialmente útil para quem quer operar robôs, mas não tem as habilidades de programação necessárias. Projetos como o PyLabRobot usam programação literária para criar scripts amigáveis para robôs de manuseio de líquidos.

Um Novo Fluxo de Trabalho para Automação

Construindo sobre essas ideias, os pesquisadores desenvolveram um fluxo de trabalho versátil para realizar conjugação interespécies robótica entre E. coli e Streptomyces. Essa configuração usa a plataforma Opentrons e permite que os usuários automatizem tanto a transformação por choque térmico de E. coli quanto a conjugação com Streptomyces.

O fluxo de trabalho abrange tanto a automação laboratorial quanto o design de interfaces amigáveis, facilitando a vida dos cientistas na hora de executar experimentos sem se sentir sobrecarregados.

Como Começar com o Novo Fluxo de Trabalho

Para realizar a transformação por choque térmico de E. coli, os cientistas podem seguir um protocolo simples. Eles misturam células competentes de E. coli com o DNA plasmidial e as submetem a um choque térmico para incentivar a absorção de DNA. Depois, as células transformadas são cultivadas e semeadas em meio de seleção, onde crescerão em colônias com as modificações desejadas.

Para a conjugação com Streptomyces, os pesquisadores preparam culturas de E. coli, as lavam e as misturam com esporos de Streptomyces. A mistura é então semeada em meio seletivo, onde os ex-conjugantes bem-sucedidos podem ser identificados.

Automação Amigável

Para simplificar todo o processo, os pesquisadores também desenvolveram um software fácil de usar para criação de protocolos. Este software se integra com Jupyter Notebooks, permitindo que os cientistas insiram detalhes chave dos experimentos e gerem os scripts robóticos necessários. Os usuários podem interagir visualmente com o notebook, simplificando a configuração e reduzindo a chance de erros.

Além de tornar o processo mais eficiente, essa abordagem estimula a colaboração entre os membros da equipe, pois permite que múltiplos usuários contribuam para os fluxos de trabalho, mesmo se outros saírem.

Testes e Validação

Para colocar seu novo fluxo de trabalho robótico à prova, os pesquisadores realizaram experimentos para avaliar a eficiência da transformação e conjugação. Com a transformação por choque térmico, eles compararam as taxas entre o robô e o método manual para garantir resultados semelhantes.

Para a eficiência da conjugação, eles experimentaram diferentes combinações de cepas de E. coli e Streptomyces, contando colônias e rastreando amostras para entender melhor as taxas de sucesso. A capacidade de realizar um maior número de amostras aprimorou sua habilidade de avaliar a verdadeira eficiência e analisar a variabilidade potencial.

O Futuro da Automação na Pesquisa com Streptomyces

Como resultado desse trabalho, os pesquisadores estabeleceram um fluxo de trabalho modular que faz a ponte entre sistemas manuais e totalmente automatizados. Ao focar na adaptabilidade e facilidade de uso, eles criaram uma configuração que empodera os usuários a controlarem suas iniciativas científicas, sejam eles especialistas experientes ou novatos na área.

Com melhorias contínuas e a introdução da programação literária, o futuro da automação robótica na pesquisa com Streptomyces parece promissor. À medida que mais laboratórios adotam essas ferramentas acessíveis, eles podem esperar economizar tempo e reduzir custos, abrindo caminho para novas descobertas e avanços em biotecnologia.

Em conclusão, a integração da pesquisa com Streptomyces com automação e robótica pode não só levar a um trabalho de laboratório mais eficiente, mas também desbloquear novas possibilidades para desenvolver antibióticos que salvam vidas e produtos agrícolas. Então, vamos levantar nossas pipetas e brindar ao futuro de bactérias e robôs trabalhando juntos-ou melhor, microbe em mão!

Fonte original

Título: ActinoMation: a literate programming approach for medium-throughput robotic conjugation of Streptomyces spp.

Resumo: The genus Streptomyces are valuable producers of antibiotics and other pharmaceutically important bioactive compounds. Advances in molecular engineering tools, such as CRISPR, has provided some access to the metabolic potential of Streptomyces, but efficient genetic engineering of strains is hindered by laborious and slow manual transformation protocols. In this paper, we present a semi-automated medium-throughput workflow for the introduction of recombinant DNA into Streptomyces spp. using the affordable and open-sourced Opentrons (OT-2) robotics platform. To increase the accessibility of the workflow we provide an open-source protocol-creator, ActinoMation. ActinoMation is a literate programming environment using Python in Jupyter Notebook. We validated the method by transforming Streptomyces coelicolor (M1152 and M1146), S. albidoflavus (J1047), and S. venezuelae (DSM40230) with the plasmids pSETGUS and pIJ12551. We demonstrate conjugation efficiencies of 3.33*10-3 for M1152 with pSETGUS and pIJ12551; 2.96*10-3 for M1146 with pSETGUS and pIJ12551; 1.21*10-5 for J1047 with pSETGUS and 4.70*10-4 with pIJ12551, and 4.97*10-2 for DSM40230 with pSETGUS and 6.13*10-2 with pIJ12551 with a false positive rate between 8.33% and 54.54%. Automation of the conjugation workflow improves consistency when handling large sample sizes that facilitates easy reproducibility on a larger scale.

Autores: Tenna Alexiadis Møller, Thom Booth, Simon Shaw, Vilhelm Krarup Møller, Rasmus J.N. Frandsen, Tilmann Weber

Última atualização: Dec 9, 2024

Idioma: English

Fonte URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.622625

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.622625.full.pdf

Licença: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Alterações: Este resumo foi elaborado com a assistência da AI e pode conter imprecisões. Para obter informações exactas, consulte os documentos originais ligados aqui.

Obrigado ao biorxiv pela utilização da sua interoperabilidade de acesso aberto.

Artigos semelhantes