A fixação na hora certa melhora os testes de tratamento do câncer

Quando se trata de problemas sérios de saúde como o câncer de ovário seroso de alto grau (HGSC), entender as opções de tratamento pode ser como navegar por um labirinto sem mapa. Nos últimos anos, vemos algumas mudanças na forma como esse tipo de câncer é tratado. Uma novidade empolgante é o uso de um grupo de drogas chamadas Inibidores de PARP. Esses medicamentos ajudam a evitar que o câncer volte depois que os pacientes fazem quimioterapia. Mas, como em muitas coisas na vida, tem um porém: nem todos os tumores respondem igualmente bem a essas drogas.

#O Papel dos Biomarcadores no Tratamento

Um fator crucial para determinar quem se beneficia dos inibidores de PARP é uma característica chamada deficiência de recombinação homóloga (HRD). Simplificando, tumores com HRD têm mais dificuldade em se reparar depois de serem danificados, tornando-se mais suscetíveis a tratamentos que causam danos ao DNA, como a quimioterapia. Por outro lado, cerca de metade dos casos de HGSC tem o que chamamos de tumores HR proficientes (HRP). Esses tumores são melhores em se consertar, o que pode levar à resistência ao tratamento e piores resultados para os pacientes.

Na clínica, descobrimos se um tumor tem HRD principalmente através de testes genéticos. Os médicos querem saber se o tumor de um paciente vai responder bem aos inibidores de PARP, e aí que entram os biomarcadores. A Sociedade Europeia de Oncologia Médica (ESMO) está a favor do uso desses biomarcadores para prever como bem um paciente pode reagir aos tratamentos, especialmente na hora de decidir se os inibidores de PARP são uma boa opção.

#Tipos de Testes de HRD

Existem três maneiras principais de testar HRD:

1. Verificando mutações genéticas específicas ligadas à reparação do DNA, como BRCA1 e BRCA2.
2. Procurando "cicatrizes" genéticas e padrões que indicam quantas vezes o DNA foi danificado.
3. Realizando testes funcionais que medem o quão bem o sistema de reparo do DNA do tumor está funcionando.

Cada um desses testes tem seus pontos fortes e fracos. Os testes baseados em DNA geralmente precisam de uma boa quantidade de células tumorais para dar resultados confiáveis. Infelizmente, nem sempre isso é possível, especialmente se o paciente já recebeu tratamento ou se a amostra foi retirada por biópsia com agulha.

Por outro lado, os testes funcionais podem funcionar mesmo quando não há muito material tumoral. Esse método avalia uma proteína chamada Rad51, que desempenha um papel chave na reparação do DNA, e pode ser feito usando amostras fixadas em formaldeído, que é uma forma comum de preservar tecido para testes.

#Superando o Problema de Manuseio da Amostra

Mostramos anteriormente que o teste funcional de HR, que conta os níveis da proteína RAD51 nas células tumorais, pode ajudar a prever como bem um paciente vai responder tanto à quimioterapia quanto aos inibidores de PARP. No entanto, também percebemos que como uma amostra de tecido é manuseada após ser retirada é crucial para obter resultados precisos. Por exemplo, se as amostras ficarem paradas sem serem processadas por muito tempo depois de serem cortadas, a quantidade de RAD51 pode cair significativamente, dificultando a obtenção de leituras precisas.

Infelizmente, não existem diretrizes padrão sobre quão rapidamente as amostras de tecido de HGSC devem ser fixadas, o que deixa uma grande lacuna na produção de resultados de testes confiáveis.

#Nosso Estudo: O Tempo Importa

Na nossa pesquisa, queríamos descobrir quanto tempo após cortar uma amostra faz diferença nos resultados dos testes. Especificamente, olhamos os níveis da proteína RAD51 em amostras de pacientes com HGSC.

#Quem Analisamos

Coletamos amostras de 27 pacientes, todos deram consentimento para participar. Pegamos amostras de várias áreas, como os ovários e tecidos ao redor. Para simplificar a análise, organizamos em dois grupos: aqueles que tinham sido coletados mais cedo (coorte retrospectiva) e aqueles coletados mais recentemente (coorte prospectiva).

#Como Testamos as Amostras

No nosso processo, pegamos cada amostra tumoral e dividimos em várias partes. Uma parte foi colocada em fixador imediatamente, enquanto as outras foram atrasadas. Depois de embutir as amostras em parafina, avaliamos os níveis de RAD51. Classificamos as amostras em dois tipos: funcionalmente HR-deficientes (fHRD) e HR-proficientes (fHRP).

Resultados Visuais: Tiramos imagens para mostrar como as mudanças no tempo de fixação afetaram os níveis de RAD51. Você podia ver claramente uma grande queda no sinal de RAD51 se a amostra ficasse parada por mais tempo.

#O Grupo Retrospectivo

No nosso grupo retrospectivo, analisamos amostras de pacientes que ainda não tinham começado o tratamento. Das 18 amostras, descobrimos que 12 tinham níveis mais baixos de RAD51 após serem atrasadas na fixação. Isso resultou em surpreendentes 33% desses tumores mudando de HR proficiente para HR deficiente, o que poderia levar a diagnósticos errados.

#O Grupo Prospectivo

No grupo prospectivo, testamos especificamente amostras após diferentes intervalos de tempo: 1, 2, 4 e 6 horas. Começamos a ver uma queda drástica nos níveis de RAD51 após apenas 2 horas em comparação ao grupo de 1 hora.

Quando chegamos à marca de 6 horas, vários tumores tinham mudado de categoria, assim como no grupo retrospectivo.

#Agrupando os Dados

Depois de avaliar ambos os grupos, combinamos os dados para ter uma ideia mais clara de como o tempo de fixação impactou os resultados. Comparamos amostras que tinham tempos de fixação curtos (menos de 2 horas) com aquelas que tinham tempos mais longos e notamos uma diminuição significativa nos níveis de RAD51 no grupo de fixação mais longa.

Curiosamente, as amostras do grupo de fixação curta tinham níveis de RAD51 mais variados do que as do grupo de fixação longa, demonstrando a importância de um processamento rápido.

#Amostras Primárias vs. Metastáticas

Também analisamos mais de perto se o tipo de tecido importava. Comparávamos amostras de tumores primários (do ovário) com amostras metastáticas (de outros locais). A maioria das amostras primárias manteve seu status de HR mesmo após uma longa espera, enquanto muitas amostras metastáticas mostraram uma queda significativa nos níveis de RAD51.

#E Agora?

Fomos mais longe para analisar o marcador geminina, que ajuda a identificar quantas células estão na parte ativa do ciclo celular. Ao contrário da RAD51, os níveis de geminina não mostraram uma queda significativa com tempos de fixação mais longos. Isso pode sugerir que diferentes biomarcadores reagem de forma diferente ao atraso.

Resumindo, descobrimos que quanto mais tempo uma amostra espera antes de ser fixada, mais isso afeta os resultados dos testes de HRD. Esperas mais longas podem levar a resultados enganosos, o que pode impactar as decisões de tratamento. Sugerimos que garantir que as amostras sejam fixadas dentro de 2 horas é a melhor prática para evitar essas imprecisões.

#Por Que Isso Importa

Ter testes confiáveis para biomarcadores de câncer é super importante para direcionar o tratamento. Testes funcionais de HR, especialmente os que olham para a RAD51, têm um grande potencial para guiar decisões sobre terapias com inibidores de PARP.

Ao destacar a importância do tempo de processamento, este estudo busca melhorar a qualidade geral dos diagnósticos no tratamento do HGSC. Com melhores protocolos para manuseio de amostras, podemos fornecer diagnósticos mais precisos e, em última análise, um melhor cuidado para os pacientes que enfrentam essa doença desafiadora.

#Conclusão

Em conclusão, precisamos lembrar que o tempo é essencial quando se trata de lidar com amostras de câncer. Procedimentos de fixação rápidos e padronizados devem ser uma prioridade, garantindo que as amostras sejam colocadas no fixador apropriado assim que possível—idealmente dentro de 2 horas. Isso ajudará a evitar confusões nos planos de tratamento e manter os pacientes no caminho da recuperação.

E lembre-se, no mundo da pesquisa sobre câncer, cada segundo conta—literalmente!