Simple Science

Scienza all'avanguardia spiegata semplicemente

# La biologia# Microbiologia

Progressi nella Metagenomica Funzionale e nella Ricerca sul Microbioma

Nuovi metodi migliorano lo studio dei microbiomi usando poca DNA.

― 5 leggere min


Scoperte rivoluzionarieScoperte rivoluzionariesul microbiomatratti microbici nascosti.I nuovi metodi metagenomici svelano
Indice

I microbiomi sono gruppi di piccole cose vive, come batteri, funghi e virus, che vivono in ambienti come i nostri corpi e il suolo. Questi piccoli organismi hanno ruoli importanti nella salute e nell'ecosistema, e possiedono un sacco di tratti genetici diversi. Però, la maggior parte di loro è difficile da coltivare in laboratorio, il che rende complicato studiarli direttamente. I ricercatori spesso usano un metodo chiamato Metagenomica per analizzare il DNA di queste comunità invece.

L'importanza del Sequenziamento del DNA

Il sequenziamento del DNA ad alta velocità permette agli scienziati di leggere il materiale genetico dai microbiomi. Questo aiuta a capire quali tipi di organismi sono presenti in un determinato microbioma e cosa potrebbero fare. Nonostante i progressi nelle tecniche di sequenziamento, i ricercatori faticano ancora a identificare e comprendere molti nuovi geni trovati in questi piccoli organismi. Un metodo proposto per migliorare la scoperta dei geni si chiama metagenomica funzionale, che non richiede di coltivare batteri in laboratorio.

Cos'è la metagenomica funzionale?

La metagenomica funzionale prevede la creazione di librerie di frammenti di DNA dai microbiomi e l'inserimento di questi frammenti in organismi ospiti. Questo permette ai geni di essere espressi, e i ricercatori possono poi cercare tratti o funzioni specifiche di questi geni. L'obiettivo è trovare nuovi geni che facciano cose interessanti, come scomporre sostanze o fornire Resistenza agli antibiotici.

Passi per creare una libreria metagenomica funzionale

  1. Estrazione del DNA: Prima, gli scienziati estraggono il DNA dal microbioma.
  2. Frammentazione del DNA: Il DNA viene spezzato in pezzi più piccoli.
  3. Clonazione del DNA: Questi pezzi vengono inseriti in vettori, che possono portarli nelle cellule ospiti.
  4. Trasformazione delle cellule ospiti: Le cellule ospiti prendono i vettori che contengono i frammenti di DNA.
  5. Selezione dei tratti: I ricercatori cercano poi tratti specifici nelle cellule ospiti che esprimono i frammenti di DNA.
  6. Analisi dei risultati: Raccolgono e analizzano i frammenti per identificare i geni di interesse.

Nuovo metodo: METa Assembly

Recentemente è stato sviluppato un nuovo processo chiamato METa assembly per creare librerie metagenomiche funzionali usando meno DNA rispetto a quanto richiesto in precedenza. Questo metodo semplifica i passi necessari per preparare queste librerie, aprendo la possibilità di studiare microbiomi che prima erano troppo difficili da analizzare, come quelli di ambienti a bassa Biomassa o campioni piccoli.

Preparazione di una libreria di inserti piccoli

Con il metodo METa assembly, i ricercatori possono preparare librerie usando quantità molto piccole di DNA, anche solo 50 ng. Questo significa che ora possono lavorare con campioni che prima non avrebbero potuto essere utilizzati. I ricercatori hanno testato questo metodo su campioni provenienti da diverse fonti, inclusi feci animali e campioni ambientali, e hanno trovato che era efficace nel creare librerie metagenomiche funzionali grandi e ricche di informazioni.

Applicazioni della metagenomica funzionale

La metagenomica funzionale può essere applicata in vari campi, inclusi medicina, agricoltura e scienze ambientali. Per esempio, i ricercatori possono usarla per trovare nuovi geni legati alla resistenza agli antibiotici o per scoprire nuovi enzimi che possono scomporre inquinanti o migliorare la produzione alimentare. La capacità di studiare microbiomi a bassa biomassa offre nuove opportunità per scoprire tratti preziosi nella genetica microbica.

Esperimenti di successo con METa Assembly

Nei loro studi, i ricercatori hanno dimostrato l'efficacia del metodo METa assembly creando con successo librerie metagenomiche funzionali da campioni a bassa input. Hanno estratto DNA da un campione fecale e un campione da un acquario, entrambi con quantità molto basse di DNA. Usando il metodo METa assembly, hanno creato librerie funzionali che contenevano geni interessanti legati alla resistenza agli antibiotici e ad altre funzioni.

Test per la resistenza agli antibiotici

Come parte dei loro esperimenti, i ricercatori hanno cercato batteri che potessero resistere agli antibiotici. Hanno preso di mira antibiotici specifici, come la tetraciclina, per vedere se i geni catturati potessero fornire resistenza. Hanno identificato diversi ceppi di batteri che mostravano una resistenza significativa, che sono stati poi sequenziati per capire meglio la loro composizione. Questo lavoro evidenzia come la metagenomica funzionale possa svelare nuovi meccanismi di resistenza nei batteri.

Studio del metabolismo dell'acarbose

Un altro studio si è concentrato sul microbioma intestinale umano e sulla sua capacità di elaborare un farmaco chiamato acarbose, usato per trattare il diabete. I ricercatori volevano vedere se potevano identificare geni coinvolti nella modifica dell'acarbose. Usando le loro librerie sviluppate, sono stati in grado di isolare due geni significativi che sembravano giocare un ruolo nel metabolismo dell'acarbose. Queste scoperte potrebbero portare a nuove intuizioni su come i microbiomi intestinali interagiscono con i farmaci.

Riepilogo dei risultati

I risultati di questi studi dimostrano che la metagenomica funzionale, soprattutto con il nuovo metodo METa assembly, può essere uno strumento potente per studiare i microbiomi. Permette ai ricercatori di lavorare con campioni di DNA più piccoli estraendo comunque alti livelli di informazioni genetiche. Questo può portare a nuove scoperte in vari settori, dalla salute alla scienza ambientale.

Direzioni future nella ricerca sui microbiomi

Date le limitazioni dei metodi attuali, i ricercatori sono ottimisti riguardo al potenziale della metagenomica funzionale per colmare le lacune nella nostra comprensione della genetica microbica. Con l'aumento della capacità di creare queste librerie, ci si aspetta che molti più microorganismi preziosi vengano studiati. Il buon funzionamento degli ecosistemi e la salute umana dipendono profondamente da una migliore comprensione dei microbiomi, rendendo quest'area di ricerca cruciale per i futuri progressi scientifici.

Conclusione

In conclusione, i progressi nella metagenomica funzionale e nel metodo METa assembly rappresentano un significativo passo avanti nella ricerca sui microbiomi. Permettendo agli scienziati di lavorare con quantità limitate di DNA, questo metodo apre nuove strade per la scoperta. Man mano che i ricercatori continuano a svelare i segreti dei microbiomi, ci si aspetta di vedere applicazioni benefiche che possono migliorare la salute, l'agricoltura e la nostra comprensione degli ecosistemi su scala globale.

Fonte originale

Titolo: Functional metagenomic discovery of novel tetracycline and acarbose resistance genes from low biomass samples using METa assembly

Estratto: A significant challenge in the field of microbiology is the functional annotation of sequence novel genes from microbiomes. The increasing pace of sequencing technology development has made solving this challenge in a high-throughput manner even more important. Functional metagenomics offer a sequence-naive and cultivation-independent solution. This forward genetics approach relies on the creation of functional metagenomic libraries (aka shotgun cloning) in which a microbial host such as E. coli is transformed with vectors containing metagenomic DNA fragments and, optimally, expresses any captured genes into a corresponding phenotype. These libraries can be screened or selected for a function of interest, such as antibiotic resistance, allowing the captured metagenomic DNA to be linked to a phenotype regardless of the sequences novelty. Unfortunately, most methods for constructing functional metagenomic libraries require large input masses of metagenomic DNA, putting many sample types off limits to this toolset. Here, we show that our recently developed functional metagenomic library preparation method, METa assembly, can be used to prepare useful libraries from much lower input DNA masses. Standard methods of functional metagenomic library preparation generally call for 5 g to 60 g of input metagenomic DNA. Here, we demonstrate that the threshold for input DNA mass can be lowered at least to 30.5 ng, a three-log decrease from prior art. These functional metagenomic libraries, prepared using between 30.5 ng and 100 ng of metagenomic DNA, nonetheless were sufficient to link three MFS efflux pumps to tetracycline resistance and capture two potential genes for degradation or resistance to the antidiabetic pharmaceutical acarbose. Our preparation of functional metagenomic libraries from aquatic samples and a model fecal swab demonstrate that METa assembly can be used to prepare functional metagenomic libraries from microbiomes that were previously incompatible with this approach. Functional metagenomic screens and selections are one of the few high-throughput methods that can link novel genes to functions and here we show that one of their significant drawbacks, a requirement for large amounts of metagenomic DNA, can now be overcome.

Autori: Terence S Crofts, H. M. Allman, E. P. Bernate, E. Franck, F. J. Oliaro, E. M. Hartmann

Ultimo aggiornamento: 2024-06-29 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.29.601325

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.29.601325.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

Articoli simili