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Nouvelle méthode pour manipuler les faisceaux de lumière améliore le suivi des molécules

Une nouvelle approche améliore la précision d'imagerie et de suivi dans la recherche moléculaire.

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Contrôler la lumière de manière spécifique est super important pour plein d'outils scientifiques comme les pinces optiques et les microscopes. Des techniques utilisées pour l'imagerie haute résolution, comme le STED et le RESOLFT, s'appuient sur la création de faisceaux de lumière avec des zones où l'intensité lumineuse tombe à zéro. Ces zones aident les scientifiques à localiser où se trouvent les atomes ou les molécules.

MINFLUX est une méthode qui sort du lot parce qu'elle se concentre sur la localisation précise des molécules uniques. Elle fait ça en changeant la forme du faisceau lumineux et en observant comment la lumière émise par une molécule change quand le faisceau se déplace autour de sa position. Cette technique est efficace, nécessitant moins d'émissions lumineuses pour atteindre une grande précision. En ajustant les formes des faisceaux lumineux de différentes manières, MINFLUX peut localiser des molécules en une, deux ou trois dimensions.

Divers appareils, comme des déflecteurs galvanométriques et piézoélectriques, servent à contrôler le mouvement de ces faisceaux. MINFLUX utilise souvent des dispositifs électro-optiques parce qu'ils sont petits, faciles à utiliser, et peuvent ajuster les faisceaux très rapidement. Cependant, d'autres méthodes sont plus compliquées et coûteuses, comme certains types de lentilles ou de miroirs.

On propose une nouvelle méthode qui utilise l'Interférométrie, ce qui implique de mélanger deux faisceaux lumineux ou plus, pour changer rapidement les formes des faisceaux de manière efficace. Notre configuration comprend un appareil à quatre canaux qui peut gérer différents types de faisceaux lumineux, permettant une imagerie détaillée et un suivi. Cette nouvelle techno a mené à des manières excitantes de suivre les molécules.

Manipuler les Faisceaux de Lumière

Dans les zones où les faisceaux de lumière sont concentrés, il y a des points, des lignes ou des plans où l'intensité lumineuse est nulle. Ces zones à zéro intensité peuvent être créées en utilisant des masques spécialement conçus. Les emplacements et les formes de ces régions à zéro intensité peuvent être ajustés en mélangeant différents faisceaux lumineux grâce à l'interférence.

On a fait des simulations et des mesures pour voir comment différentes combinaisons de faisceaux pouvaient faire bouger ces zones à zéro intensité. Par exemple, en combinant un faisceau polarisé circulaire avec un faisceau gaussien, on peut déplacer latéralement une zone sans intensité. De même, une autre combinaison de faisceaux crée un motif unique qui permet des mesures encore plus précises. Changer les angles et les formes de ces faisceaux modifie non seulement la position des zones nulles, mais permet aussi aux chercheurs d'étudier les molécules avec plus de précision.

Un Nouveau Type d'Appareil

On a conçu un nouvel appareil qui utilise l'interférométrie pour manipuler les faisceaux lumineux en temps réel. Cet appareil a trois parties principales : un rotateur de polarisation, un façonneur de faisceau, et un combineur de faisceau. Ensemble, ces parties permettent à deux faisceaux distincts de se mélanger et de produire des motifs lumineux spécifiques. Notre appareil fonctionne efficacement avec deux couleurs de lumière différentes, ce qui améliore la précision de l'imagerie de différents types de molécules.

Le rotateur de polarisation ajuste l'intensité des faisceaux avant qu'ils ne se combinent. Le façonneur de faisceau modifie la forme des faisceaux lumineux afin qu'ils puissent interagir plus efficacement. Après le façonnage, les faisceaux sont combinés, créant le motif d'interférence souhaité sans avoir besoin d'ajustements complexes et de systèmes de rétroaction.

Notre système peut manipuler quatre chemins indépendants à la fois, permettant l'examen de deux couleurs de lumière en même temps. Toutes les parties du système travaillent ensemble pour stabiliser les faisceaux, permettant une manipulation rapide et précise de la lumière.

Imagerie Rapide et Efficace

Pour suivre avec précision et étudier les molécules, il est essentiel d'explorer leurs émissions en utilisant différentes formes de faisceaux. Notre système propose différentes configurations qui peuvent être utilisées pour la localisation en 2D et 3D de molécules uniques. En combinant plusieurs formes de faisceaux, on peut atteindre un niveau de précision plus élevé pendant le processus d'imagerie.

Utiliser notre nouvel appareil permet un mouvement rapide des faisceaux, ce qui est essentiel pour suivre comment les molécules se comportent au fil du temps. Cette capacité est clé pour étudier divers processus biologiques en temps réel, avec des délais minimaux.

Notre approche interférométrique est particulièrement efficace pour les mouvements axiaux, garantissant que le suivi peut se faire rapidement et avec un haut niveau de détail. Cela permet aussi une meilleure observation de comment les molécules changent de position au fil du temps, ce qui est important dans beaucoup de domaines de recherche.

Applications Réelles

On a testé nos nouvelles méthodes avec des objets statiques et mobiles, y compris des structures d'ADN conçues et des cellules. Par exemple, on a disposé plusieurs molécules de colorant fluorescent sur un origami ADN et on a réussi à suivre leurs emplacements avec une précision incroyable.

Les résultats ont montré que tous les emplacements ont été résolus avec des marges d'erreur très faibles. Cette précision est cruciale pour les applications qui nécessitent des mesures exactes, comme comprendre comment les protéines interagissent et se déplacent dans les cellules.

Un exemple de notre capacité de suivi impliquait une brin d'ADN qui se déplaçait va-et-vient entre deux points. On a mesuré avec précision son mouvement et confirmé la distance entre ces points, démontrant une haute résolution temporelle dans nos mesures.

En plus, on a montré la capacité à suivre deux types de molécules de colorant différentes en même temps. Ce suivi en deux couleurs permet aux scientifiques de mieux comprendre les interactions entre différentes molécules et comment elles se comportent les unes par rapport aux autres.

Avantages de la Nouvelle Méthode

Notre approche pour manipuler les faisceaux de lumière apporte plusieurs avantages. Elle est capable de s'adapter à différentes situations sans avoir besoin de configurations mécaniques complexes. Cette polyvalence rend notre méthode applicable dans un large éventail de domaines, de la biologie à la science des matériaux.

Le nouvel appareil est compact et économique par rapport aux solutions existantes, tout en fournissant des résultats de haute qualité. Avec la capacité de générer plusieurs formes et couleurs de faisceaux, les chercheurs peuvent recueillir plus d'informations que jamais, menant à une meilleure compréhension des processus moléculaires complexes.

De plus, cette méthode permet un scan et un suivi continus des molécules, ce qui pourrait améliorer les techniques de recherche à l'avenir, comme enquêter sur comment les neurones communiquent dans le cerveau ou observer la dynamique des interactions protéiques dans les cellules.

Conclusion

En résumé, on a introduit une nouvelle manière de manipuler les faisceaux de lumière pour l'imagerie et le suivi de molécules avec une haute précision. Notre méthode utilise l'interférométrie pour obtenir un contrôle rapide et précis sur la lumière, permettant des techniques avancées en recherche scientifique. On pense que ce travail sera d'un grand bénéfice pour les études futures et améliorera les capacités des méthodes existantes, ouvrant la voie à des insights plus profonds sur la dynamique et les interactions moléculaires.

Source originale

Titre: A Fast Interferometric Beam Shaper for Multi-Emitter 3D MINFLUX

Résumé: Beams of light that feature an intensity zero are essential to a variety of optical microscopy methods. Super-resolution techniques like STED and RESOLFT, together with localization strategies like MINFLUX and MINSTED, rely on accurate and fast displacements of such beams and their zeros. Extending these methods to the third dimension requires axial deflection, which, in contrast to lateral deflection, remains technologically challenging on the microsecond scale. Here, we present a fast general-purpose beam-shaping polarization interferometer that, instead of displacing the entire beam, enables such axial deflections by deforming the beam shape to deflect its zero. Based on this approach, we showcase a four-channel dual-color excitation system for three-dimensional MINFLUX imaging and tracking. We include first demonstrations of improved MINFLUX localization schemes that utilize the combination of distinct beam shapes and three-dimensional multi-emitter tracking. We believe that the presented approach will facilitate the broader adoption of three dimensional MINFLUX and provides a versatile basis for future implementations of advanced single-molecule localization methods.

Auteurs: Francisco Balzarotti, M. K. Geismann, A. Gomez-Segalas, A. Passera, M. Shirzadian

Dernière mise à jour: 2024-02-15 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.12.09.570565

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2023.12.09.570565.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

Merci à biorxiv pour l'utilisation de son interopérabilité en libre accès.

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