Avancées dans la production de pABA par des bactéries
La recherche améliore la production bactérienne d'acide p-aminobenzoïque grâce à des modifications génétiques.
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Table des matières
La biotechnologie industrielle utilise de minuscules organismes vivants, comme des Bactéries, pour fabriquer des produits utiles au lieu de dépendre des produits chimiques à base de pétrole. C'est important car l'industrie chimique produit beaucoup de gaz à effet de serre, qui nuisent à l'environnement. Une partie de ce processus biologique est connue sous le nom de voie shikimique. Cette voie aide à créer des acides aminés et d'autres éléments précieux comme des ingrédients alimentaires, des médicaments et même des combustibles.
La voie shikimique commence avec des molécules simples qui se combinent pour former des molécules plus grandes à travers une série d'étapes. Par exemple, elle peut produire des composés comme le chorismate, qui peut ensuite être transformé en acides aminés aromatiques comme la phénylalanine, la tyrosine et le tryptophane. Ces acides aminés sont importants pour divers produits et processus. Cependant, fabriquer ces produits en grandes quantités n'est pas facile. Les défis incluent la disponibilité des matières premières, le contrôle du processus, et certains produits qui peuvent être nuisibles aux bactéries.
Les scientifiques essaient souvent d'augmenter la Production de ces produits précieux en changeant l'activité de Gènes spécifiques dans les bactéries. Cela se fait en activant ou désactivant certains gènes, ou en augmentant leur activité. Cependant, il y a encore des incertitudes sur les gènes à modifier pour chaque produit. Les chercheurs ont remarqué que certaines combinaisons de changements de gènes fonctionnent mieux que d'autres pour produire des éléments spécifiques dans différents types de bactéries.
Une Étude de Cas : Production d'Acide p-Aminobenzoïque (pABA)
Un des produits qui intéressent les scientifiques est l'acide p-aminobenzoïque, ou pABA. Ce composé est important car il est utilisé pour produire du folate, une vitamine, et a des applications dans l'industrie pharmaceutique. Pour des bactéries comme Pseudomonas putida, fabriquer du pABA implique plusieurs gènes qui travaillent ensemble dans une série de réactions, à partir de blocs de construction simples.
Pour identifier quels gènes limitent la production de pABA, les chercheurs ont décidé d'utiliser une méthode appelée conception expérimentale statistique (DoE). Cette approche aide à étudier les effets de plusieurs facteurs simultanément tout en réduisant le nombre d'expériences nécessaires. Au lieu de tester chaque gène un par un, ils pouvaient examiner plusieurs gènes en même temps. Cette stratégie aide à découvrir quels gènes sont les plus importants pour augmenter la production.
Les chercheurs ont sélectionné un ensemble de gènes impliqués dans la production de pABA et ont créé différentes souches de bactéries en utilisant ces gènes. Ils ont utilisé des parties spécifiques de l'ADN qui peuvent réguler les gènes pour augmenter ou diminuer leur activité. Après avoir construit ces nouvelles souches bactériennes, ils ont mesuré combien de pABA chaque souche produisait.
Résultats des Expériences
Parmi les expériences prévues, la plupart des nouvelles souches bactériennes ont été créées avec succès. La production de pABA variait beaucoup entre les différentes souches. Certaines souches produisaient juste un peu, tandis que d'autres étaient beaucoup plus productives.
Les données recueillies lors de ces expériences ont aidé les chercheurs à comprendre quels gènes influençaient positivement ou négativement la production de pABA. Les gènes qui avaient besoin d'une activité plus élevée pour une meilleure production incluaient pabAB et aroB. En revanche, certains gènes, lorsqu'ils étaient trop actifs, réduisaient en fait la quantité de pABA produite.
Notamment, la souche la plus performante a montré une forte relation entre les niveaux d'expression des gènes et la quantité de pABA produite. Cela a indiqué que l'ajustement minutieux de l'activité des gènes est crucial pour maximiser la production.
Optimisation Supplémentaire de la Production de pABA
Après avoir déterminé les effets des différentes activités géniques, l'étape suivante était d'optimiser encore plus la production de pABA. Les chercheurs ont considéré non seulement d'augmenter l'activité des gènes, mais aussi la possibilité de rétablir certains gènes à leurs niveaux naturels. Ils ont utilisé de nouvelles techniques comme les conceptions bicistroniques pour améliorer encore l'expression des gènes bénéfiques.
Dans ces nouveaux tests, ils ont découvert qu'une légère surexpression des gènes importants menait à une amélioration de la production de pABA. Ils ont également constaté que l'expression de aroB se démarquait comme particulièrement impactante sur la production de pABA. En ajustant stratégiquement les expressions géniques, ils pouvaient encore repousser les limites de la production.
Importance de la Recherche et Directions Futures
Cette recherche est cruciale pour développer des moyens plus durables de fabriquer des produits chimiques. En utilisant des organismes vivants, on peut réduire la dépendance aux combustibles fossiles. La possibilité d'affiner l'activité des gènes dans les bactéries ouvre beaucoup de possibilités pour produire des composés précieux plus efficacement.
Malgré les avancées réalisées, des défis subsistent. L'optimisation de l'expression génique est une tâche complexe. En plus d'ajuster l'activité des gènes, d'autres facteurs jouent également un rôle. Ceux-ci incluent la disponibilité des matières premières et les conditions dans lesquelles les bactéries se développent. Les études futures devront explorer ces aspects pour améliorer encore la production.
Les chercheurs visent à intégrer diverses stratégies pour améliorer la performance des bactéries conçues pour produire des composés utiles. Parmi ces stratégies figurent l'utilisation de meilleurs gènes provenant d'autres organismes, la gestion de l'environnement dans lequel les bactéries se développent, et peut-être l'élimination des processus concurrents qui pourraient détourner les ressources de la production de pABA.
En conclusion, les stratégies développées et les connaissances acquises grâce à cette recherche mettent en évidence le potentiel d'utiliser des bactéries pour produire de manière durable des produits chimiques importants comme le pABA. À mesure que la biotechnologie continue d'avancer, on espère que ces microorganismes ingénierés joueront un rôle significatif dans la production chimique future, offrant des alternatives à la fois écologiques et efficaces.
Titre: Combinatorial engineering reveals shikimate pathway bottlenecks in para-aminobenzoic acid production in Pseudomonas putida
Résumé: Combinatorial approaches in metabolic engineering enable the optimization of multigene pathways, thereby improving product titers. However, the optimization of complex metabolic pathways is hindered by their multiple interactions. Testing all possible combinations of suitable genetic parts is often prevented by the large number of possible variants. A valuable alternative to this is to use statistical design of experiments and linear modeling to collect important information for optimization without testing every possible combination. The shikimate pathway is an example of a complex metabolic pathway involved in the production of aromatic compounds, which are prevalent in industry. In this study, we explore the impact of the modulation of the expression levels of all the genes in the shikimate and para-aminobenzoic acid (pABA) biosynthesis pathways for pABA production (a widely used industrial intermediate) in Pseudomonas putida. We used this approach to select 14 representative strains from a total of 512 possible combinations. We obtained a range of product titers from 2 to 186.2 mg/l. This information was used to guide a second round of strain construction to further increase the production to 232.1 mg/l. Using this strategy, we demonstrate that aroB expression, encoding 3-dehydroquinate synthase, is a significant limiting factor in the production of pABA.
Auteurs: Maria Suarez-Diez, M. A. Campos-Magana, S. Moreno-Paz, V. A. P. Martins dos Santos, L. Garcia-Morales
Dernière mise à jour: 2024-06-18 00:00:00
Langue: English
Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.17.599342
Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.17.599342.full.pdf
Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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