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Nouvelle technique révèle le comportement des ARN dans les cellules vivantes

smLiveFISH permet de suivre en temps réel les mouvements de l'ARN sans les altérer.

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L'ARN, ou acide ribonucléique, joue un rôle super important dans la façon dont nos cellules fabriquent des protéines et contrôlent l'activité des gènes. C'est pas juste la séquence de l'ARN qui compte, mais aussi comment et où il se déplace dans la cellule qui influence sa fonction. L'ARN interagit avec des protéines et d'autres éléments cellulaires à des endroits et moments précis, ce qui est essentiel pour son travail.

Par exemple, une protéine appelée ZBP1 aide à transporter un type spécifique d'ARN (ARNm β-actine) du noyau (où les gènes sont stockés) vers la partie avant d'une cellule, appelée le bord avant. Une autre protéine, EF1α, maintient ces molécules d'ARN en place au bord de la cellule afin qu'elles puissent être utilisées pour fabriquer des protéines juste où elles sont nécessaires.

Méthodes Actuelles pour Étudier l'ARN

Les scientifiques ont développé des méthodes pour observer l'ARN en temps réel dans des cellules vivantes. Cependant, beaucoup de ces méthodes impliquent d'ajouter des séquences à l'ARN, ce qui peut prendre beaucoup de temps et changer la façon dont l'ARN se comporte. Certaines techniques ne peuvent étudier qu'une grande quantité d'ARN à la fois, ce qui limite ce qu'on peut apprendre sur des molécules d'ARN individuelles. D'autres méthodes peuvent émettre trop de bruit de fond, rendant difficile de voir ce qui se passe.

Introduction de SmLiveFISH

Ici, on introduit une nouvelle technique appelée smLiveFISH. Cette méthode permet aux scientifiques de voir des molécules d'ARN individuelles dans des cellules vivantes sans les changer. Elle utilise un système basé sur CRISPR qui peut se fixer à l'ARN et le suivre pendant qu'il se déplace dans la cellule. Grâce à cette méthode, les chercheurs peuvent étudier des types spécifiques d'ARN dans différents types de cellules.

Comment ça Marche SmLiveFISH

SmLiveFISH utilise un système d'ADN et d'ARN pour marquer l'ARN dans la cellule. Ce système peut être ajusté pour cibler des molécules d'ARN spécifiques. Quand les cellules sont traitées avec ce système, elles produisent des protéines qui se connectent à l'ARN. Ces protéines peuvent se fixer à différentes parties de l'ARN sans le changer, permettant aux scientifiques de suivre les mouvements de l'ARN.

Dans des tests initiaux, les scientifiques ont examiné l'ARNm NOTCH2, qui code une protéine située à la surface des cellules, et l'ARNm MAP1B, qui aide à la structure des cellules nerveuses. Ils ont découvert que l'ARNm NOTCH2 se comporte de deux manières différentes. Certaines molécules sont très stables, tandis que d'autres se déplacent rapidement. Ce mouvement dépend de si l'ARN est lié aux processus de fabrication de protéines dans la cellule.

Observer les Mouvements de l'ARNm NOTCH2

Les scientifiques voulaient aussi voir comment l'ARNm NOTCH2 se déplace à l'intérieur des cellules. Ils ont découvert deux groupes d'ARNm NOTCH2 en fonction de leur vitesse de mouvement. Certains sont lents tandis que d'autres sont rapides. Quand ils ont arrêté la production de protéines avec un médicament, l'ARN lent a rapidement diminué, montrant que ce comportement dépend de si des protéines sont fabriquées.

Ils ont utilisé une nouvelle technique pour mesurer comment les molécules d'ARN se déplacent en temps réel, et ils ont vu que stopper la production de protéines changeait le comportement de l'ARNm NOTCH2.

Recherche sur l'ARNm MAP1B

Ensuite, les chercheurs ont regardé l'ARNm MAP1B pour voir s'il se comportait différemment. Ils ont trouvé que l'ARNm MAP1B a tendance à se déplacer vers le bord de la cellule en lignes droites, contrairement à l'ARNm NOTCH2. Ce mouvement dirigé suggère que tandis que l'ARNm NOTCH2 est stable et principalement situé près du noyau, l'ARNm MAP1B se déplace vers le bord de la cellule, probablement pour aider à la structure de la cellule.

En utilisant smLiveFISH, les scientifiques ont mesuré à quelle distance l'ARNm MAP1B est du noyau et du bord de la cellule. Ils ont confirmé que l'ARNm MAP1B traîne souvent près de la partie extérieure de la cellule.

L'Impact de l'Inhibition de la Traduction

Pour comprendre comment la production de protéines affecte l'ARNm MAP1B, les chercheurs ont traité les cellules avec un médicament qui stoppe la traduction. Même quand la traduction était inhibée, l'ARNm MAP1B se déplaçait toujours vers le bord de la cellule. Étrangement, ce traitement semblait faire bouger l'ARNm MAP1B un peu plus vite.

Cependant, quand l'ARNm MAP1B a atteint le bord de la cellule, son mouvement a ralenti, montrant que cet ARN peut toujours fonctionner normalement même quand la fabrication de protéines est arrêtée. Une partie de l'ARNm a aussi formé des clusters après traitement, indiquant des changements dans la façon dont ils sont gérés à l'intérieur de la cellule.

SmLiveFISH : Un Nouvel Outil pour Comprendre l'ARN

SmLiveFISH est un outil puissant pour étudier l'ARN dans des cellules vivantes. Cette méthode permet de suivre l'ARN en temps réel sans le modifier, et peut être utilisée pour explorer comment l'ARN se comporte dans différentes conditions, comme pendant la production de protéines. Les scientifiques peuvent utiliser cette technique pour examiner divers types d'ARN dans plein de situations, ce qui en fait un outil polyvalent dans le domaine de la biologie.

Applications de SmLiveFISH

SmLiveFISH peut aider les chercheurs à comprendre divers processus biologiques. Par exemple, il peut être utilisé pour étudier comment l'ARN se comporte dans différentes maladies. Comprendre comment le transport de l'ARN fonctionne peut mener à des idées sur des conditions comme les troubles neurodégénératifs, où les protéines de liaison à l'ARN sont souvent mutées.

De plus, la capacité de voir comment l'ARN se déplace en réponse à des traitements ou dans différents types de cellules peut fournir des connaissances critiques sur son rôle dans la santé et la maladie.

Conclusion

Avec smLiveFISH, les chercheurs ont une nouvelle méthode pour visualiser et comprendre la dynamique de l'ARN dans des cellules vivantes. Cette approche éclaire la façon dont l'ARN est transporté et géré dans des zones spécifiques de la cellule, révélant des fonctions importantes de l'ARN qui étaient auparavant obscurcies dans les études de cellules fixes.

Alors que les scientifiques continuent d'explorer le monde de l'ARN et de ses rôles, smLiveFISH va probablement devenir un outil essentiel pour débloquer de nouvelles découvertes en biologie cellulaire et en médecine. Les connaissances acquises grâce à cette méthode peuvent façonner notre compréhension des processus fondamentaux et aider à traiter des maladies liées à la dysfonction de l'ARN.

Source originale

Titre: Single-molecule live-cell RNA imaging with CRISPR-Csm

Résumé: High-resolution, real-time imaging of RNA is essential for understanding the diverse, dynamic behaviors of individual RNA molecules in single cells. However, single-molecule live-cell imaging of unmodified endogenous RNA has not yet been achieved. Here, we present single-molecule live-cell fluorescence in situ hybridization (smLiveFISH), a robust approach that combines the programmable RNA-guided, RNA-targeting CRISPR-Csm complex with multiplexed guide RNAs for efficient, direct visualization of single RNA molecules in a range of cell types, including primary cells. Using smLiveFISH, we tracked individual endogenous NOTCH2 and MAP1B mRNA transcripts in living cells and identified two distinct localization mechanisms: co-translational translocation of NOTCH2 mRNA at the endoplasmic reticulum, and directional transport of MAP1B mRNA toward the cell periphery. This method has the potential to unlock principles governing the spatiotemporal organization of native transcripts in health and disease.

Auteurs: Jennifer A Doudna, C. Xia, D. Colognori, X. Jiang, K. Xu

Dernière mise à jour: 2024-07-16 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.14.603457

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.14.603457.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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