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# Biologie # Microbiologie

Compter les bactéries : Méthodes et idées

Apprends comment les scientifiques comptent avec précision les bactéries en utilisant des techniques de dilution.

Monika Jain, Shuhada Begum, Shuvam Bhuyan, Chayanika Nath, Uchakankhi Kashyap, Lukapriya Dutta, Shubhra Jyoti Giri, Nishita Deka, Manabendra Mandal, Aditya Kumar, Suvendra Kumar Ray

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Techniques de comptage Techniques de comptage des bactéries bactéries en labo. Méthodes efficaces pour compter les
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Les Bactéries sont de toutes petites choses vivantes qu'on trouve partout autour de nous. Elles se cachent dans notre corps, dans la nourriture qu'on mange, et même dans l'air qu'on respire. Certaines bactéries sont sympas, comme celles qui aident à digérer, tandis que d'autres peuvent nous rendre malades. Dans les labos, les scientifiques étudient souvent les bactéries pour comprendre comment elles poussent et se comportent. Ça peut nous aider à développer de nouveaux médicaments ou à trouver des moyens de prévenir les infections.

Mais d'abord, voyons comment on compte ces petites bestioles.

Compter les Bactéries

Une des façons clés pour les scientifiques de compter les bactéries, c'est de déterminer combien de bactéries viables (ou vivantes) sont présentes dans un échantillon. Cette méthode de comptage existe depuis plus d'un siècle, depuis qu'un gars nommé Robert Koch a essayé de compter les bactéries dans l'eau en 1883. Depuis, compter les bactéries est devenu super important en microbiologie.

Quand on a des échantillons avec beaucoup de bactéries, comme une goutte d'eau de mare, c'est pas facile de les compter directement. Imagine essayer de compter les grains de sable dans un bac à sable ! Du coup, les scientifiques diluent d'abord l'échantillon. Diluer, ça veut dire le mélanger avec un liquide (généralement une solution saline) pour qu'il soit moins concentré. Comme ça, quand les chercheurs mettent l'échantillon sur une boîte de Pétri remplie d'une gelée nutritive appelée agar, chaque petite unité vivante - ou colonie - grandit suffisamment pour être vue et comptée.

La Série de Dilution

Alors, comment les scientifiques diluent un échantillon ? Ils utilisent quelque chose appelé série de dilution. C'est simplement une méthode étape par étape pour mélanger une quantité connue de bactéries avec une quantité spécifique de saline, créant une série de solutions de plus en plus diluées. Par exemple, si tu prends 1 mL d'un échantillon de bactéries épais et que tu le mélanges avec 9 mL de saline, tu as fait une dilution de 10 fois. Si tu fais ça plusieurs fois, tu peux créer plusieurs forces différentes de bactéries jusqu'à des concentrations très faibles.

C'est là que ça devient intéressant : la technique qu'ils choisissent pour cette dilution compte. Ils peuvent utiliser différents volumes de l'échantillon, ce qui change la précision du comptage des bactéries. Par exemple, utiliser des volumes plus grands tend à donner des résultats plus cohérents, tandis que des petites quantités d'échantillon peuvent mener à des résultats plus aléatoires - comme un jeu de dés imprévisible !

Il s'avère que, quand on mélange des plus grandes quantités de liquide, on obtient une meilleure représentation des bactéries présentes. Si tu n'utilises qu'une petite goutte, c'est comme essayer de sortir un seul poisson rouge d'un océan géant - tu pourrais avoir de la chance, mais il est plus probable que tu en rates plein.

Le Grand Débat sur le Volume

Il y a deux facteurs principaux à considérer quand les scientifiques diluent des bactéries : la quantité d'échantillon qu'ils utilisent et la complexité du processus. Moins le processus est complexe, moins il y a de chances de faire des erreurs. Mais si tu utilises moins d'échantillon, les comptes peuvent être moins fiables. C'est un équilibre !

Utiliser un petit volume, comme juste 1 microlitre (qui est vraiment minuscule), peut sembler efficace, mais c'est aussi compliqué. C'est comme essayer de verser une seule goutte de sirop sur une pile de crêpes. Ça peut vite déborder ou totalement rater les crêpes ! D'un autre côté, si tu utilises des volumes plus importants comme 100 microlitres, tu pourrais faire moins d'erreurs, mais ça prendra plus de temps et nécessitera plus d'étapes.

Qu'est-ce qui est Mieux ?

Dans une expérience, utiliser un petit volume a montré une légère meilleure précision, mais ça venait avec plus de complexité et de potentiel d'erreur. Et quand les scientifiques ont comparé leurs résultats entre différentes méthodes, ils ont découvert que même si les petits volumes semblaient prometteurs, ils n'étaient pas aussi fiables que les plus grandes quantités dans l'ensemble.

Différents Types de Bactéries

Dans cette étude, les scientifiques n'ont pas seulement travaillé avec un type de bactéries. Ils ont aussi regardé différentes souches, comme E. Coli et R. pseudosolanacearum. E. coli est une bactérie courante qui a un aspect non mucoïde - pense à une vraie dragée, lisse et brillante. Pendant ce temps, R. pseudosolanacearum a un aspect mucoïde car elle produit une substance visqueuse, ce qui la rend collante, comme un bonbon qui s'accroche aux autres.

Les scientifiques ont utilisé une méthode de dépôt, où ils laissaient tomber de petites quantités de bactéries diluées sur des plaques d'agar pour compter combien de colonies poussaient. E. coli était compté après 12-14 heures, tandis que l'autre souche prenait beaucoup plus de temps, 48 heures, à cause de sa croissance plus lente - on peut dire que c'était une bactérie paresseuse !

Qu'en est-il du Diluant ?

Maintenant, pendant qu'on parle de dilution, regardons le volume du diluant, qui est juste le volume de saline utilisé. Les scientifiques se demandaient si la quantité de saline affecterait la précision de leur comptage de bactéries. Après tout, si tu utilises plus ou moins de saline, ça devrait pas changer quelque chose ? En fait, dans l'ensemble, ça ne change pas grand-chose. La précision du comptage restait à peu près la même, peu importe la quantité de saline, sauf pour ce fameux volume de 1 microlitre.

L'Impact du Volume de l'Échantillon

Dans une recherche astucieuse, les scientifiques ont déposé de petites quantités - 5, 10, 15 et 20 microlitres - sur des plaques d'agar et ont compté les colonies qui poussaient. Ils ont découvert que plus le volume utilisé était grand, plus les comptages de colonies étaient cohérents. Donc si tu comptes des bactéries, il semblerait que plus c'est gros, mieux c'est !

C'est en gros comme essayer de prédire combien de bonbons il y a dans un bocal. Si tu prends une poignée plutôt que juste quelques-uns, ton estimation sera beaucoup plus solide avec la plus grande cuillère !

Le Facteur de Complexité

En jouant avec ces méthodes, il est devenu clair que la complexité du processus de dilution avait un grand impact sur l'exactitude des comptages. Si les scientifiques faisaient une simple dilution par 10, ils n'auraient pas à se soucier autant des petites erreurs par rapport à des procédures plus complexes. Cette compréhension simple peut faire gagner du temps et éviter des cœurs brisés liés aux erreurs de comptage !

Notes Finales sur les Bactéries et la Dilution

La principale leçon ? Si tu veux bien faire, utilise un plus grand volume d'échantillon quand tu comptes des bactéries. Et fais attention à cette goutte de 1 microlitre - même si ça peut sembler une bonne idée, c’est souvent plus de soucis que ça en vaut.

Avec tout ça, on peut mieux comprendre comment observer et compter les bactéries en labo. Chaque petite culture raconte sa propre histoire, et grâce à des mesures précises, on peut partager ce récit de l'existence microbienne, découvrant lesquelles sont amies et lesquelles pourraient nous mener à une visite à l'hôpital. Et qui sait, peut-être qu'une prochaine fois que tu seras dans un labo, tu te sentiras comme un vrai détective des bactéries toi aussi !

Source originale

Titre: Trade-off between sample volume passaged and number of passages involved during serial dilution for bacterial enumeration

Résumé: Accurate enumeration of bacteria in a culture is the first step in both fundamental as well as applied research in microbiology. Serial dilution is an age old method used widely by researchers for enumerating viable bacteria in a culture where a specific sample volume is passaged successively to a specific diluent volume. Here, we demonstrated that a higher sample volume is a better representation of bacterial population than a lower sample volume, which was in concordance with the random nature of bacterial distribution in culture. Therefore, a bigger sample to diluent ratio during serial dilution appears more favorable for an accurate bacterial enumeration than a smaller ratio. But surprisingly, enumeration using the different dilution ratios such as 1:9, 1:99 and 1:999 in 1.0 mL final volume yielded similar results with the exception of 1:999, where 1 L sample was passaged. However, in 10.0 mL final volume of dilution, the above three dilution ratios exhibited similar bacterial enumeration. The experiment was performed using two different bacterial cultures such as Escherichia coli and Ralstonia pseudosolanacearum. Our results indicated that the advantage gained due to lesser number of passages in case of a lower sample volume could overcome the disadvantage associated with it, thereby co-aligning the different dilution ratios with regards to enumeration. Hence, although in laboratory, 1:9 dilution ratio is usually performed during serial dilution, our results suggest that dilution ratios such as 1:99 in 1 mL dilution volume and ratios such as 1:99 and 1:999 in 10 mL dilution volume are equally effective, which also reduces time, cost and labor.

Auteurs: Monika Jain, Shuhada Begum, Shuvam Bhuyan, Chayanika Nath, Uchakankhi Kashyap, Lukapriya Dutta, Shubhra Jyoti Giri, Nishita Deka, Manabendra Mandal, Aditya Kumar, Suvendra Kumar Ray

Dernière mise à jour: 2024-12-08 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.28.625891

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.28.625891.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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