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# Biologie # Bioingénierie

Révolutionner la recherche : Streptomyces rencontre l'automatisation

Découvre comment l'automatisation transforme la recherche sur les Streptomyces pour de meilleurs résultats.

Tenna Alexiadis Møller, Thom Booth, Simon Shaw, Vilhelm Krarup Møller, Rasmus J.N. Frandsen, Tilmann Weber

― 10 min lire


Streptomyces et Robots Streptomyces et Robots s'unissent dans la recherche sur les Streptomyces. L'automatisation booste l'efficacité
Table des matières

Les Streptomyces sont des bactéries fascinantes qui ont beaucoup apporté dans divers domaines, surtout en médecine et en agriculture. On les connaît surtout pour produire des antibiotiques, des substances qui aident à combattre les infections causées par des bactéries nuisibles. On pourrait dire que ces petits gars sont comme des mini super-héros, sauvant la mise une infection à la fois !

Ces bactéries produisent aussi des agents agricoles et des enzymes. Les agents agricoles aident les cultures à mieux pousser et à repousser les nuisibles, tandis que les enzymes sont des protéines qui accélèrent les réactions chimiques dans les organismes vivants. Pense aux enzymes comme les petits travailleurs qui font en sorte que tout fonctionne bien.

Qu'est-ce que le séquençage de nouvelle génération et les outils génétiques ?

Grâce aux avancées technologiques, les scientifiques ont développé des méthodes pour lire l'ensemble du matériel génétique des organismes, y compris les Streptomyces. Ce processus s'appelle le séquençage de nouvelle génération. C'est un peu comme lire un livre de cuisine très compliqué qui te dit comment préparer tous les plats d'un resto, mais avec des gènes au lieu de recettes.

Avec de plus en plus de génomes à étudier, les chercheurs ont commencé à exploiter les nombreuses capacités cachées des Streptomyces. Cette nouvelle connaissance a motivé les scientifiques à créer des outils qui aident à modifier ces bactéries pour améliorer leur utilité.

Un développement passionnant est la technologie CRISPR. CRISPR est une méthode qui permet aux scientifiques d'apporter des modifications précises à l'ADN d'un organisme. Pense à ça comme utiliser un traitement de texte pour éditer un document, où tu peux ajouter, supprimer ou changer des mots au besoin. Cet outil a simplifié la tâche des chercheurs pour modifier les Streptomyces et améliorer leur capacité à produire des substances précieuses.

Le défi des rendements de Transformation

Malgré les avancées technologiques, il reste des défis à relever pour utiliser les Streptomyces en recherche et en industrie. Un obstacle majeur est que faire entrer l'ADN dans ces bactéries peut être compliqué. Ce processus s'appelle la transformation, et l'efficacité de la transformation varie souvent, surtout quand on travaille avec des souches non testées.

Pour faciliter la transformation, les chercheurs utilisent souvent une méthode appelée conjugaison intergénérique, qui consiste à mélanger les Streptomyces avec une autre bactérie appelée E. Coli. Les souches d'E. coli ont un don pour accepter et transférer de l'ADN, ce qui en fait des partenaires fiables dans ce processus.

Cependant, exécuter cette méthode à grande échelle - pense à des milliers de souches - peut être une tâche très chronophage, nécessitant beaucoup de ressources. Cela rend la demande pour des techniques plus efficaces et évolutives significative.

Place aux robots

Pour relever ces défis, les scientifiques se tournent vers l'Automatisation et la robotique. Les plateformes de manipulation de liquides automatisées peuvent réaliser des tâches comme le pipetage, le mélange et le transfert d'échantillons, le tout sans mains humaines. Imagine des robots faisant le boulot pendant que les chercheurs sirotent leur café et profitent de la vue - ça fait rêver, non ?

Ces systèmes robotiques existent sous différentes formes. Certains sont des appareils tout-en-un, ce qui signifie qu'ils peuvent tout faire dans une seule configuration. D'autres sont modulaires, permettant aux utilisateurs de mixer et associer des composants selon leurs besoins. Bien que les grands systèmes robotiques puissent offrir un rendement impressionnant, ils ont souvent un coût élevé et nécessitent des opérateurs qualifiés. C'est là que la flexibilité entre en jeu, surtout pour les petits labos de recherche et les start-ups qui n'ont pas les mêmes ressources.

Les goulets d'étranglement de l'automatisation

Quand il s'agit de mettre en œuvre des systèmes robotiques, il y a cinq défis clés, ou goulets d'étranglement, que les chercheurs doivent surmonter :

  1. Coût : Beaucoup de ces configurations robotiques sont chères, rendant difficile pour les petits labos d'y investir. Une solution flexible qui s'adapte à leur budget est souvent plus désirable.

  2. Compétences en programmation : La plupart des scientifiques ne sont pas formés à la programmation informatique, ce qui peut compliquer le processus d'automatisation des protocoles. C'est comme demander à quelqu'un qui cuisine pour le plaisir de devenir soudainement chef étoilé !

  3. Transfert de connaissances : Quand les projets se terminent, l'expertise précieuse peut être perdue s'il n'y a pas de documentation adéquate pour les utilisateurs futurs. Un fort turnover du personnel peut aggraver ce problème, entraînant une perte de savoir-faire.

  4. Normalisation : Beaucoup de labos peuvent ne pas suivre des procédures normalisées de manière cohérente, ce qui peut rendre les expériences difficiles à reproduire et les résultats difficiles à comparer.

  5. Variabilité des protocoles : Les scientifiques adaptent souvent les protocoles au fil du temps, ce qui entraîne des incohérences. Cela peut entraver les efforts pour rationaliser l'automatisation, car il devient difficile de décider quelle version d'un protocole suivre.

Systèmes modulaires : une solution flexible

Face à ces défis, des systèmes modulaires comme Opentrons ont gagné en popularité. Ces plateformes sont abordables et adaptables, permettant aux chercheurs de personnaliser leurs configurations robotiques sans avoir besoin de connaissances complexes en programmation. Pense à ça comme un set de LEGO pour la science !

Le robot Opentrons est alimenté par des ordinateurs Raspberry Pi et utilise des scripts Python simples pour contrôler ses actions. Ce système réduit non seulement les coûts, mais encourage aussi les utilisateurs à concevoir leurs propres modules et protocoles.

Bien qu'il existe des workflows automatiques pour E. coli, peu ont été développés pour les Streptomyces. Certaines recherches ont montré des succès dans l'utilisation de l'automatisation pour prédire et prioriser des grappes de gènes bactériens et les cloner pour des études ultérieures.

Le besoin de communication ouverte

Un aspect important du développement de ces workflows est le partage d'informations et la promotion de la collaboration. La transparence est essentielle, permettant aux chercheurs de divers horizons de travailler ensemble efficacement. En favorisant un environnement de communication ouverte, les chercheurs peuvent constituer une ressource partagée de configurations abordables et personnalisables, économisant ainsi du temps et de l'argent pour tout le monde impliqué.

Place à la programmation littéraire

Une autre avancée passionnante dans ce domaine est la programmation littéraire. Cette approche permet aux chercheurs d'écrire du code qui peut être facilement compris, combinant des descriptions en langage naturel avec le code lui-même. C'est comme assembler une recette où les instructions sont assez claires pour que n'importe qui puisse les suivre, même s'il n'est pas un expert en cuisine !

Cela peut être particulièrement utile pour ceux qui veulent faire fonctionner des robots mais qui manquent des compétences en programmation associées. Des projets comme PyLabRobot utilisent la programmation littéraire pour créer des scripts conviviaux pour les robots de manipulation de liquides.

Un nouveau workflow pour l'automatisation

En s'appuyant sur ces idées, les chercheurs ont développé un workflow polyvalent pour réaliser une conjugaison interspécifique robotisée entre E. coli et Streptomyces. Ce setup utilise la plateforme Opentrons et permet aux utilisateurs d'automatiser à la fois la transformation par choc thermique d'E. coli et la conjugaison avec Streptomyces.

Le workflow englobe à la fois l'automatisation de laboratoire et la conception d'interfaces conviviales, facilitant la tâche des scientifiques pour exécuter des expériences sans se sentir dépassés.

Comment démarrer avec le nouveau workflow

Pour réaliser la transformation par choc thermique d'E. coli, les scientifiques peuvent suivre un protocole simple. Ils mélangent des cellules E. coli compétentes avec l'ADN plasmidique et les soumettent à un choc thermique pour encourager l'absorption de l'ADN. Ensuite, les cellules transformées sont cultivées et plaquées sur un milieu de sélection, où elles formeront des colonies contenant les modifications désirées.

Pour la conjugaison avec Streptomyces, les chercheurs préparent des cultures d'E. coli, les lavent et les mélangent avec des spores de Streptomyces. Le mélange est ensuite plaqué sur un milieu sélectif, où les ex-conjugants réussis peuvent être identifiés.

Automatisation conviviale

Pour rationaliser l'ensemble du processus, les chercheurs ont également développé un logiciel facile à utiliser pour la création de protocoles. Ce logiciel s'intègre avec Jupyter Notebooks, permettant aux scientifiques d'entrer les détails clés de l'expérience et de générer les scripts robotiques nécessaires. Les utilisateurs peuvent interagir visuellement avec le notebook, simplifiant la configuration et réduisant les risques d'erreurs.

En plus de rendre le processus plus efficace, cette approche favorise la collaboration entre les membres de l'équipe, car elle permet à plusieurs utilisateurs de contribuer aux workflows même si d'autres s'en vont.

Tests et validation

Pour mettre leur nouveau workflow robotique à l'épreuve, les chercheurs ont mené des expériences pour évaluer l'efficacité de la transformation et de la conjugaison. Pour la transformation par choc thermique, ils ont comparé les taux entre le robot et la méthode manuelle pour s'assurer de résultats similaires.

Pour l'efficacité de la conjugaison, ils ont expérimenté différentes combinaisons de souches d'E. coli et de Streptomyces, comptant les colonies et dépistant des échantillons pour mieux comprendre les taux de réussite. La possibilité de traiter un plus grand nombre d'échantillons a amélioré leur capacité à évaluer la véritable efficacité et à analyser la variabilité potentielle.

L'avenir de l'automatisation dans la recherche sur les Streptomyces

Grâce à ce travail, les chercheurs ont établi un workflow modulaire qui comble le fossé entre les systèmes manuels et totalement automatisés. En mettant l'accent sur l'adaptabilité et la convivialité, ils ont créé un setup qui donne aux utilisateurs le contrôle de leurs efforts scientifiques, qu'ils soient des experts chevronnés ou des novices dans le domaine.

Avec les améliorations continues et l'introduction de la programmation littéraire, l'avenir de l'automatisation robotique dans la recherche sur les Streptomyces s'annonce prometteur. À mesure que de plus en plus de labos adoptent ces outils accessibles, ils peuvent espérer gagner du temps et réduire les coûts, ouvrant ainsi la voie à de nouvelles découvertes et avancées en biotechnologie.

En conclusion, l'intégration de la recherche sur les Streptomyces avec l'automatisation et la robotique pourrait non seulement rendre le travail de laboratoire plus efficace, mais aussi débloquer de nouvelles possibilités pour développer des antibiotiques salvateurs et des produits agricoles. Alors levons nos pipettes et trinquons à l'avenir des bactéries et des robots travaillant main dans la main - ou devrais-je dire, microbe dans la main !

Source originale

Titre: ActinoMation: a literate programming approach for medium-throughput robotic conjugation of Streptomyces spp.

Résumé: The genus Streptomyces are valuable producers of antibiotics and other pharmaceutically important bioactive compounds. Advances in molecular engineering tools, such as CRISPR, has provided some access to the metabolic potential of Streptomyces, but efficient genetic engineering of strains is hindered by laborious and slow manual transformation protocols. In this paper, we present a semi-automated medium-throughput workflow for the introduction of recombinant DNA into Streptomyces spp. using the affordable and open-sourced Opentrons (OT-2) robotics platform. To increase the accessibility of the workflow we provide an open-source protocol-creator, ActinoMation. ActinoMation is a literate programming environment using Python in Jupyter Notebook. We validated the method by transforming Streptomyces coelicolor (M1152 and M1146), S. albidoflavus (J1047), and S. venezuelae (DSM40230) with the plasmids pSETGUS and pIJ12551. We demonstrate conjugation efficiencies of 3.33*10-3 for M1152 with pSETGUS and pIJ12551; 2.96*10-3 for M1146 with pSETGUS and pIJ12551; 1.21*10-5 for J1047 with pSETGUS and 4.70*10-4 with pIJ12551, and 4.97*10-2 for DSM40230 with pSETGUS and 6.13*10-2 with pIJ12551 with a false positive rate between 8.33% and 54.54%. Automation of the conjugation workflow improves consistency when handling large sample sizes that facilitates easy reproducibility on a larger scale.

Auteurs: Tenna Alexiadis Møller, Thom Booth, Simon Shaw, Vilhelm Krarup Møller, Rasmus J.N. Frandsen, Tilmann Weber

Dernière mise à jour: 2024-12-09 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.622625

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.12.05.622625.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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