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# Biologie # Neurosciences

Avancées dans les techniques d'imagerie tissulaire en 3D

Un aperçu de l'impact de RIM-Deep sur l'imagerie des tissus biologiques en 3D.

Yisi Liu, P. Wang, J. Zou, H. Zhou

― 7 min lire


RIM-Deep : Une révolution RIM-Deep : Une révolution dans l'imagerie tissulaire 3D et la profondeur des images. Un nouveau système améliore la clarté
Table des matières

Les techniques de clarification des tissus sont des méthodes utilisées pour rendre les tissus biologiques suffisamment clairs pour l'imagerie, ce qui nous permet de voir leur structure en trois dimensions (3D). C'est différent des méthodes traditionnelles d'observation des tissus, qui peuvent être limitées en profondeur de vue. Les nouvelles techniques réduisent la diffusion de la lumière, rendant plus facile l'observation même des plus petits détails dans les échantillons de tissus profonds. Ces méthodes sont utiles dans divers domaines, y compris l'étude du cerveau, le développement, le système immunitaire et le cancer.

Techniques optiques pour l'imagerie 3D

Pour obtenir des images 3D de qualité de ces tissus clarifiés, les scientifiques utilisent différents types de microscopes. Parmi les méthodes populaires, on trouve la microscopie à feuille de lumière, la microscopie à deux photons et la microscopie confocale. Ces instruments nécessitent des lentilles spéciales qui peuvent se concentrer sur des échantillons profonds tout en maintenant des images claires.

Lors de l'imagerie des tissus profonds, il est important d'utiliser des lentilles offrant un grossissement faible à moyen et pouvant fonctionner à distance. Cependant, ces lentilles doivent aussi garder un bon focus à différentes profondeurs. Un problème survient lorsque la lumière traverse différentes couches de l'échantillon et de la lentille, provoquant une distorsion, ce qui conduit à des images floues. Ce problème s'appelle aberration sphérique, et cela se produit lorsque les rayons lumineux se concentrent à différents points selon l'endroit où ils entrent dans la lentille. Ce souci peut vraiment affaiblir la qualité des images que l'on obtient.

Pour résoudre cela, les chercheurs cherchent à faire correspondre l'indice de réfraction du milieu d'immersion de la lentille (le liquide dans lequel se trouve la lentille) avec le milieu de l'échantillon. S'ils ne correspondent pas, la qualité des images diminue. Certaines lentilles sont équipées de réglages ajustables pour aider avec ce décalage, mais obtenir un accord parfait peut être difficile.

Développement du système RIM-Deep

Pour résoudre les problèmes d'imagerie, un nouveau système appelé RIM-Deep a été développé. Ce système comprend une chambre d'immersion qui améliore la façon dont la lumière traverse l'échantillon sans distorsion. Le design garantit que l'indice de réfraction entre la lentille et le milieu de l'échantillon est plus stable. Utilisé avec des objectifs d'immersion spéciaux, le système RIM-Deep permet une imagerie de haute qualité et détaillée des tissus à de grandes profondeurs.

Comment les échantillons sont préparés pour l'imagerie

Avant l'imagerie, les échantillons doivent passer par divers traitements. Par exemple, lorsqu'on étudie des types spécifiques de souris, on utilise un anesthésiant, et le cœur est rincé avec une solution pour préparer le cerveau à un traitement ultérieur. Le cerveau est ensuite fixé dans une solution spéciale pendant la nuit pour préserver sa structure.

Après cela, le tissu subit un processus de clarification utilisant des méthodes spécifiques qui permettent une meilleure visualisation. Une méthode implique une série de lavages suivie de traitements pour bien marquer les cellules avant l'imagerie. Cela nécessite des étapes précises, comme l'utilisation d'anticorps spécifiques pour mettre en évidence différents types de cellules.

Techniques d'imagerie et résultats

Pour l'imagerie, les scientifiques utilisent des microscopes confocaux qui aident à capturer la structure 3D des échantillons. Des plats d'imagerie spéciaux maintiennent les échantillons en place, et divers logiciels d'acquisition d'images aident à traiter et analyser les données collectées.

Dans les études avec RIM-Deep, les chercheurs ont constaté qu'ils pouvaient imager profondément dans les tissus cérébraux, jusqu'à environ 5 millimètres. C'est une amélioration significative par rapport aux méthodes traditionnelles, où la profondeur d'imagerie était souvent limitée. Avec ce système, les chercheurs peuvent observer clairement des structures détaillées dans le cerveau et les réseaux vasculaires.

Observation des changements vasculaires après un AVC

Une application de cette technologie est l'étude des AVC, qui se produisent lorsque l'approvisionnement en sang au cerveau est perturbé. En utilisant le système RIM-Deep, les scientifiques peuvent mieux voir comment les vaisseaux sanguins changent après un AVC. En utilisant diverses techniques de clarification sur les cerveaux de souris, ils peuvent visualiser l'ensemble du réseau des vaisseaux sanguins, même dans les zones ayant subi une réduction du flux sanguin.

Avantages du RIM-Deep en recherche

Le système RIM-Deep a montré un grand potentiel pour améliorer les capacités d'imagerie dans divers domaines de la biologie. Un des principaux avantages est qu'il fonctionne bien avec des microscopes confocaux standards, qui sont plus largement disponibles et moins chers que certains systèmes d'imagerie haut de gamme. Cela rend les techniques d'imagerie importantes plus accessibles à de nombreux chercheurs.

En permettant une imagerie plus profonde avec une meilleure qualité, RIM-Deep permet aux scientifiques d'étudier des processus biologiques complexes et des structures qui étaient auparavant difficiles à visualiser en détail. Cela peut mener à une meilleure compréhension et potentiellement à de nouvelles découvertes dans des domaines comme la recherche sur le cerveau, la biologie du cancer, et plus encore.

Limitations et domaines à améliorer

Bien que RIM-Deep représente une avancée significative dans la technologie d'imagerie, il y a encore des limitations. Par exemple, la vitesse d'imagerie est plus lente par rapport à d'autres méthodes comme la microscopie à feuille de lumière. Cela signifie que les chercheurs peuvent devoir attendre plus longtemps pour les résultats, et ils pourraient avoir besoin de techniques avancées de traitement d'image pour obtenir les meilleures images possibles.

Un autre défi est que le système n'a été testé que sur des types de tissus spécifiques, notamment les tissus cérébraux. Son efficacité pour imager d'autres tissus reste à explorer entièrement. Le décalage d'indice de réfraction a également des limitations en fonction des types de lentilles disponibles, ce qui peut affecter la qualité de l'image si l'indice de l'échantillon est trop éloigné de la plage de la lentille.

Directions futures

Pour faire face à ces limitations, les recherches futures pourraient se concentrer sur l'amélioration de la vitesse d'imagerie en utilisant le système RIM-Deep. Cela pourrait impliquer l'intégration de méthodes de balayage avancées et de techniques d'apprentissage automatique pour l'analyse d'image. De telles innovations pourraient aider à rendre l'imagerie plus rapide et plus efficace tout en maintenant une haute qualité.

De plus, à mesure que les profondeurs d'imagerie augmentent, maintenir un bon rapport signal-bruit devient plus difficile. Développer de meilleurs algorithmes pour réduire le bruit et améliorer la qualité de l'image sera essentiel pour réussir l'imagerie des tissus profonds.

En conclusion, le système RIM-Deep marque une amélioration notable dans la façon dont nous pouvons imager des tissus biologiques en 3D. En s'attaquant à certains défis clés en matière de profondeur et de qualité d'imagerie, il ouvre des portes pour des études biologiques plus détaillées. Cependant, des améliorations continues et des innovations sont cruciales pour maximiser son potentiel et élargir ses applications dans divers domaines de recherche.

Source originale

Titre: A novel method (RIM-Deep) enhances imaging depth and resolution stability of deep-cleared brain tissue in inverted confocal microscopy

Résumé: The increasing use of tissue clearing techniques underscores the urgent need for cost-effective and simplified deep imaging methods. While traditional inverted confocal microscopes excel in high-resolution imaging of tissue sections and cultured cells, they face limitations in deep imaging of cleared tissues due to refractive index mismatches between the immersion media of objectives and sample container. To overcome these challenges, the RIM-Deep was developed to significantly improve deep imaging capabilities without compromising the normal function of the confocal microscope. This system facilitates deep immunofluorescence imaging of the prefrontal cortex in cleared macaque tissue, extending imaging depth from 2 mm to 5 mm. Applied to an intact and cleared Thy1-EGFP mouse brain, the system allowed for clear axonal visualization at high imaging depth. Moreover, this advancement enables large-scale, deep 3D imaging of intact tissues. In principle, this concept can be extended to any imaging modality, including existing inverted wide-field, confocal, and two-photon microscopy. This would significantly upgrade traditional laboratory configurations and facilitate the study of connectomics in the brain and other tissues.

Auteurs: Yisi Liu, P. Wang, J. Zou, H. Zhou

Dernière mise à jour: 2024-12-18 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.19.604108

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.07.19.604108.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

Merci à biorxiv pour l'utilisation de son interopérabilité en libre accès.

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