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Faghi in Evoluzione: L'Impatto dei Profaghi

La ricerca sull'evoluzione dei fagi mette in mostra il ruolo dei profagi nel colpire i batteri.

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Evoluzione dei fagi eEvoluzione dei fagi eprofaginegli studi sull'evoluzione dei fagi.I profagi giocano un ruolo fondamentale
Indice

L'evoluzione diretta dei fagi è un metodo usato negli esperimenti per stimolare cambiamenti nella genetica e nelle caratteristiche dei fagi (virus che infettano i batteri). L'obiettivo è creare fagi con tratti specifici, spesso per aiutarli a infettare batteri difficili da colpire. Le tecniche per ottenere questo possono variare, ma di solito includono diversi cicli di crescita dei fagi su diversi tipi di batteri e poi raccogliere i fagi risultanti per usarli nel ciclo successivo. Questo processo è anche conosciuto come addestramento dei fagi, e uno dei suoi obiettivi è sviluppare fagi in grado di attaccare batteri diventati resistenti ad altri fagi.

Un metodo specifico per l'evoluzione diretta è chiamato Protocollo Appelmans. Questo metodo cerca di aumentare la gamma di batteri che i fagi possono infettare, concentrandosi sull'uso dei fagi per trattamenti contro batteri dannosi. In questo approccio, viene aggiunta una miscela di fagi a diversi tipi di batteri. Dopo la crescita, la miscela di fagi viene prelevata dai batteri e ulteriormente diluita per consentire altri cicli di crescita. Ad ogni ciclo, l'obiettivo è produrre fagi che possono infettare una varietà più ampia di batteri.

Il Ruolo dei Profagi

I profagi sono segmenti di DNA virale che possono esistere all'interno del DNA batterico. Questi possono rimanere inattivi finché certe condizioni non li attivano. Molti batteri pericolosi portano questi segmenti, che possono dar loro vantaggi, come renderli più virulenti o aiutarli a evitare attacchi da altri virus.

Negli studi in cui si evolvono i fagi, l'attivazione dei profagi durante il processo può portare a risultati inaspettati. Ad esempio, alcune ricerche hanno trovato che durante l'uso del protocollo Appelmans, l'attivazione dei profagi ha contribuito a una gamma più ampia di bersagli batterici per la miscela di fagi. Riconoscere l'influenza di questi profagi negli esperimenti è fondamentale per progettare studi migliori in futuro.

Evoluzione dei Fagi in Pseudomonas Aeruginosa

In uno studio che utilizzava il protocollo Appelmans, i ricercatori hanno esaminato l'evoluzione dei fagi in un batterio chiamato Pseudomonas aeruginosa, noto per essere un grave patogeno umano. Hanno osservato che all'inizio dell'esperimento, un profago presente nei batteri è stato attivato, portando a un rapido aumento della gamma di batteri che i fagi potevano infettare. Questo profago poteva infettare un totale di cinque diversi bersagli batterici, permettendo di prosperare per tutta la durata dell'esperimento.

Dopo diversi cicli del protocollo Appelmans, i ricercatori hanno isolato fagi geneticamente legati a questo profago. Questa scoperta evidenzia l'importanza di confermare la composizione genetica dei fagi prima e dopo che passano attraverso esperimenti di evoluzione.

Obiettivi dello Studio

L'obiettivo principale dello studio era esaminare i cambiamenti genetici che si verificano nei fagi mentre evolvono per infettare più tipi di batteri. Per fare ciò, sono stati scelti tre tipi di fagi, e l'obiettivo era vedere come potessero adattarsi per infettare batteri che normalmente non avrebbero colpito. Sono stati condotti tre cicli di esperimenti utilizzando diversi ceppi di laboratorio di batteri, inclusi alcuni isolati clinici.

Inizialmente, è stato scoperto che ciascuno dei tre fagi poteva infettare solo due tipi di batteri. Tuttavia, dopo solo pochi cicli del protocollo Appelmans, sono stati osservati cambiamenti. I fagi hanno cominciato a eliminare batteri che di solito non potevano infettare, mostrando che si stavano adattando molto più rapidamente del previsto. In totale, sono stati isolati cinque ceppi di fagi che potevano infettare tutti i batteri bersaglio testati.

Comprendere i Profagi e la Loro Importanza

Per confermare se i fagi evoluti fossero connessi ai profagi nei batteri, sono stati condotti test aggiuntivi. Questi test cercavano la presenza di profagi che potessero influenzare i risultati del processo di evoluzione. Curiosamente, diversi ceppi hanno mostrato segni di avere questi profagi, e quando i ricercatori hanno indotto questi profagi, hanno scoperto che potevano infettare una varietà di batteri.

Attraverso l'analisi genomica, i ricercatori hanno identificato due tipi di profagi all'interno di uno dei batteri clinici, rivelando che i cinque ceppi di fagi evoluti provenivano da uno di questi profagi. Questo dimostra che la presenza e l'attivazione dei profagi possono essere un fattore significativo in come i fagi evolvono durante tali esperimenti.

Analizzare la Gamma di Ospiti dei Fagi

Per esplorare ulteriormente la capacità dei fagi evoluti, i ricercatori hanno confrontato la loro gamma di infezione con i profagi provenienti dai batteri. Hanno condotto esperimenti per vedere se i ceppi di fagi evoluti potessero infettare gli stessi tipi di batteri dei profagi. Curiosamente, mentre i fagi evoluti potevano effettivamente infettare diversi batteri, non cambiavano il potenziale complessivo di infezione dei profagi stessi.

Nonostante fossero sottoposti a condizioni evolutive, i profagi hanno mantenuto la loro capacità di infettare più ceppi senza mostrare cambiamenti nella loro gamma di ospiti. Questa scoperta sottolinea un aspetto importante della ricerca: la distinzione tra adattamenti naturali dei fagi e quelli facilitati dalla presenza di profagi negli ospiti batterici.

Implicazioni per la Terapia con Fagi

L'evoluzione dei fagi ha delle implicazioni significative, soprattutto per lo sviluppo di trattamenti contro infezioni batteriche. I fagi vengono considerati come potenziali terapie, specialmente poiché molti batteri stanno diventando resistenti agli antibiotici tradizionali. Tuttavia, la presenza di profagi può complicare la creazione e l'uso dei fagi nel trattamento, poiché contenuti indesiderati di profagi potrebbero interferire con l'efficacia o la sicurezza delle preparazioni di fagi.

Con la consapevolezza che l'attivazione dei profagi può influenzare i risultati sperimentali, i ricercatori sono sempre più attenti alla necessità di tenere conto di questi fattori nei loro studi. È essenziale lavorare per migliorare i disegni sperimentali che differenziano chiaramente tra fagi evoluti e quelli risultanti da attività di profagi. Questa comprensione potrebbe ottimizzare gli approcci di terapia con fagi garantendo che i fagi giusti siano selezionati per trattare le infezioni.

Strategie per la Ricerca Futura

Per andare avanti, i ricercatori raccomandano di utilizzare diverse tecniche per affrontare le sfide presentate dai profagi. Queste strategie includono il sequenziamento dei genomi sia dei fagi iniziali che di quelli evoluti per verificarne le origini. Inoltre, il sequenziamento dei ceppi batterici utilizzati negli esperimenti può fornire informazioni su quali elementi genetici potrebbero essere presenti e influenzare i risultati.

Eseguire test per identificare eventuali attività antagonistiche tra diversi ceppi batterici può anche evidenziare la presenza di profagi o altri elementi virali. In questo modo, i ricercatori possono comprendere meglio le dinamiche in gioco negli esperimenti di evoluzione dei fagi, aiutando a selezionare ospiti batterici più adatti per la propagazione mirata dei fagi.

Implementando queste strategie, gli studi futuri possono migliorare il processo di evoluzione dei fagi e gestire meglio il ruolo dei profagi in questi esperimenti. Questo può portare a fagi più efficaci per potenziali trattamenti contro le infezioni batteriche, specialmente in contesti clinici dove la resistenza agli antibiotici è in aumento.

Conclusione

L'evoluzione diretta dei fagi offre un metodo prezioso per adattare i fagi a mirare a una gamma più ampia di batteri. Tuttavia, la presenza e l'attivazione dei profagi all'interno degli ospiti batterici possono complicare l'interpretazione dei risultati. Comprendere le dinamiche di queste relazioni può portare a migliori disegni sperimentali, un migliore utilizzo delle risorse e conclusioni più accurate nella ricerca di terapie efficaci con i fagi.

Riconoscere la duplice natura dei profagi-sia come ostacoli che come opportunità-sarà fondamentale per i futuri progressi nella ricerca sui fagi. Con continui sforzi per sfruttare il potenziale dei fagi, la combinazione della conoscenza sui profagi e delle tecniche di evoluzione diretta può aprire la strada a nuove strategie per combattere le infezioni batteriche.

Fonte originale

Titolo: Directed evolution of bacteriophages: impacts of prolific prophage

Estratto: Various directed evolution methods exist that seek to procure bacteriophages with expanded host ranges, typically targeting phage-resistant or non-permissive bacterial hosts. The general premise of these methods is to propagate phage on multiple bacterial hosts, pool the lysate, and repeat the propagation process until phage(s) can form plaques on the target host(s). In theory, this propagation process produces a phage lysate that contains input phages and their evolved phage progeny. However, in practice, this phage lysate can also include prophages originating from bacterial hosts. Here we describe our experience implementing one directed evolution method, the Appelmans protocol, to study phage evolution in the Pseudomonas aeruginosa phage-host system, in which we observed rapid host-range expansion of the phage cocktail. Further experimentation and sequencing analysis revealed that this observed host-range expansion was due to a Casadabanvirus prophage that originated from one of the Appelmans hosts. Host-range analysis of the prophage showed that it could infect five of eight bacterial hosts initially used, allowing it to proliferate and persist through the end of the experiment. This prophage was represented in half of the sequenced phage samples isolated from the Appelmans experiment. This work highlights the impact of prophages in directed evolution experiments and the importance of incorporating sequencing data in analyses to verify output phages, particularly for those attempting to procure phages intended for phage therapy applications. This study also notes the usefulness of intraspecies antagonism assays between bacterial host strains to establish a baseline for inhibitory activity and determine presence of prophage. IMPORTANCEDirected evolution is a common strategy for evolving phages to expand host range, often targeting pathogenic strains of bacteria. In this study we investigated phage host-range expansion using directed evolution in the Pseudomonas aeruginosa system. We show that prophage are active players in directed evolution and can contribute to observation of host-range expansion. Since prophage are prevalent in bacterial hosts, particularly pathogenic strains of bacteria, and all directed evolution approaches involve iteratively propagating phage on one or more bacterial hosts, the presence of prophage in phage preparations is a factor that needs to be considered in experimental design and interpretation of results. These results highlight the importance of screening for prophages either genetically or through intraspecies antagonism assays during selection of bacterial strains and will contribute to improving experimental design of future directed evolution studies.

Autori: Tracey Lee Peters, J. Schow, J. T. Van Leuven, H. A. Wichman, C. R. Miller

Ultimo aggiornamento: 2024-06-29 00:00:00

Lingua: English

URL di origine: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.28.601269

Fonte PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.28.601269.full.pdf

Licenza: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Modifiche: Questa sintesi è stata creata con l'assistenza di AI e potrebbe presentare delle imprecisioni. Per informazioni accurate, consultare i documenti originali collegati qui.

Si ringrazia biorxiv per l'utilizzo della sua interoperabilità ad accesso aperto.

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