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Phages en évolution : L'impact des prophages

Des recherches sur l'évolution des phages mettent en avant le rôle des prophages dans la cible des bactéries.

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L'Évolution Dirigée des phages est une méthode utilisée dans des expériences pour encourager des changements dans la génétique et les caractéristiques des phages (virus qui infectent les bactéries). Le but est de créer des phages avec des traits spécifiques, souvent pour les aider à infecter des bactéries difficiles à cibler. Les méthodes pour y arriver varient, mais elles incluent généralement plusieurs cycles de culture de phages sur différents types de bactéries et ensuite la collecte des phages résultants pour les utiliser dans le cycle suivant. Ce processus est aussi connu sous le nom d'entraînement des phages, et l'un de ses objectifs est de développer des phages capables d'attaquer les bactéries devenues résistantes à d'autres phages.

Une méthode spécifique pour l'évolution dirigée s'appelle le Protocole Appelmans. Cette méthode vise à augmenter la gamme de bactéries que les phages peuvent infecter, en se concentrant sur l'utilisation des phages pour traiter des bactéries nuisibles. Dans cette approche, un mélange de phages est ajouté à différents types de bactéries. Après la croissance, le mélange de phages est prélevé sur les bactéries et dilué pour permettre d'autres cycles de croissance. À chaque cycle, l'objectif est de produire des phages capables d'infecter une plus grande variété de bactéries.

Le rôle des Prophages

Les prophages sont des segments d'ADN viral qui peuvent exister à l'intérieur de l'ADN bactérien. Ceux-ci peuvent rester inactifs jusqu'à ce que certaines conditions les déclenchent pour s'activer. Beaucoup de bactéries dangereuses portent ces segments, ce qui peut leur donner des avantages, comme les rendre plus virulentes ou les aider à éviter les attaques d'autres virus.

Dans les études où les phages sont évolués, l'activation des prophages pendant le processus peut apporter des résultats inattendus. Par exemple, certaines recherches ont montré qu'au cours de l'utilisation du protocole Appelmans, l'activation des prophages a contribué à une plus grande gamme de cibles bactériennes pour le mélange de phages. Reconnaître l'influence de ces prophages dans les expériences est crucial pour concevoir de meilleures études à l'avenir.

Évolution des phages dans Pseudomonas Aeruginosa

Dans une étude utilisant le protocole Appelmans, les chercheurs se sont penchés sur l'évolution des phages dans une bactérie appelée Pseudomonas aeruginosa, connue pour être un pathogène humain sérieux. Ils ont observé qu'au début de l'expérience, un prophage présent dans les bactéries a été activé, entraînant une augmentation rapide de la gamme de bactéries que les phages pouvaient infecter. Ce prophage pouvait infecter un total de cinq cibles bactériennes différentes, lui permettant de prospérer tout au long de l'expérience.

Après plusieurs cycles du protocole Appelmans, les chercheurs ont isolé des phages qui étaient liés génétiquement à ce prophage. Cette découverte met en lumière l'importance de confirmer la composition génétique des phages avant et après leur passage par des expériences d'évolution.

Objectifs de l'étude

L'objectif principal de l'étude était d'examiner les changements génétiques qui se produisent chez les phages à mesure qu'ils évoluent pour infecter plus de types de bactéries. Pour ce faire, trois types de phages ont été choisis, et l'objectif était de voir comment ils pouvaient s'adapter pour infecter des bactéries qu'ils ne cibleraient normalement pas. Trois cycles d'expérimentations ont été menés en utilisant différents souches de bactéries en laboratoire, y compris quelques isolats cliniques.

Au départ, il a été découvert que chacun des trois phages ne pouvait infecter que deux types de bactéries. Cependant, après seulement quelques cycles du protocole Appelmans, des changements ont été observés. Les phages ont commencé à éliminer les bactéries qu'ils ne pouvaient généralement pas infecter, montrant qu'ils s'adaptaient beaucoup plus rapidement que prévu. Au total, cinq souches de phages ont été isolées capables d'infecter toutes les bactéries cibles testées.

Comprendre les prophages et leur signification

Pour confirmer si les phages évolués étaient liés aux prophages dans les bactéries, des tests supplémentaires ont été effectués. Ces tests ont cherché la présence de prophages qui pourraient influencer les résultats du processus d'évolution. Fait intéressant, plusieurs souches ont montré des signes d'avoir ces prophages, et lorsque les chercheurs ont induit ces prophages, ils ont découvert qu'ils pouvaient également infecter une variété de bactéries.

Grâce à l'analyse du génome, les chercheurs ont identifié deux types de prophages dans l'une des bactéries cliniques, révélant que les cinq souches de phages évoluées provenaient de l'un de ces prophages. Cela montre que la présence et l'activation des prophages peuvent être un facteur significatif dans la façon dont les phages évoluent pendant ces expériences.

Analyser la gamme d'hôtes des phages

Pour explorer davantage la capacité des phages évolués, les chercheurs ont comparé leur gamme d'infection avec celle des prophages des bactéries. Ils ont réalisé des expériences pour voir si les souches de phages évolués pouvaient infecter les mêmes types de bactéries que les prophages. Fait intéressant, bien que les phages évolués puissent effectivement infecter plusieurs bactéries, ils n'ont pas modifié le potentiel d'infection global des prophages eux-mêmes.

Malgré des conditions évolutives, les prophages ont maintenu leur capacité à infecter plusieurs souches sans montrer de changements dans leur gamme d'hôtes. Cette constatation souligne un aspect important de la recherche : la distinction entre les adaptations naturelles des phages et celles facilitées par la présence de prophages dans les hôtes bactériens.

Implications pour la thérapie par phages

L'évolution des phages a des implications significatives, surtout pour le développement de traitements contre les infections bactériennes. Les phages sont considérés comme des thérapies potentielles, surtout alors que de nombreuses bactéries deviennent résistantes aux antibiotiques traditionnels. Cependant, la présence de prophages peut compliquer la création et l'utilisation des phages dans le traitement, car un contenu de prophages non désiré pourrait interférer avec l'efficacité ou la sécurité des préparations de phages.

Avec la connaissance que l'activation des prophages peut influencer les résultats expérimentaux, les chercheurs sont de plus en plus conscients de la nécessité de prendre en compte ces facteurs dans leurs études. Il est essentiel de travailler à améliorer les conceptions expérimentales qui différencient clairement les phages évolués de ceux résultant des activités des prophages. Cette compréhension pourrait optimiser les approches de thérapie par phages en s'assurant que les bons phages sont sélectionnés pour traiter les infections.

Stratégies pour les futures recherches

Pour avancer, les chercheurs recommandent d'utiliser plusieurs techniques pour aborder les défis présentés par les prophages. Ces stratégies incluent le séquençage des génomes des phages initiaux et évolués pour vérifier leur origine. De plus, le séquençage des souches bactériennes utilisées dans les expériences peut fournir des informations sur les éléments génétiques présents et affectant les résultats.

Réaliser des tests pour identifier toute activité antagoniste entre différentes souches bactériennes peut également mettre en évidence la présence de prophages ou d'autres éléments viraux. Cela permet aux chercheurs de mieux comprendre la dynamique en jeu dans les expériences d'évolution des phages, aidant à choisir des hôtes bactériens plus adaptés pour la propagation ciblée des phages.

En mettant en œuvre ces stratégies, les futures études peuvent améliorer le processus d'évolution des phages et mieux gérer le rôle des prophages dans ces expériences. Cela peut conduire à des phages plus efficaces pour des traitements potentiels contre les infections bactériennes, surtout dans les milieux cliniques où la résistance aux antibiotiques est en hausse.

Conclusion

L'évolution dirigée des phages fournit une méthode précieuse pour adapter les phages afin de cibler une gamme plus large de bactéries. Cependant, la présence et l'activation des prophages au sein des hôtes bactériens peuvent compliquer l'interprétation des résultats. Comprendre la dynamique de ces relations peut conduire à de meilleures conceptions expérimentales, une meilleure allocation des ressources et des conclusions plus précises dans la quête de thérapies par phages efficaces.

Reconnaître la double nature des prophages - à la fois obstacles et opportunités - sera crucial pour les avancées futures dans la recherche sur les phages. Avec des efforts continus pour exploiter le potentiel des phages, la combinaison des connaissances sur les prophages et des techniques d'évolution dirigée peut ouvrir la voie à de nouvelles stratégies pour lutter contre les infections bactériennes.

Source originale

Titre: Directed evolution of bacteriophages: impacts of prolific prophage

Résumé: Various directed evolution methods exist that seek to procure bacteriophages with expanded host ranges, typically targeting phage-resistant or non-permissive bacterial hosts. The general premise of these methods is to propagate phage on multiple bacterial hosts, pool the lysate, and repeat the propagation process until phage(s) can form plaques on the target host(s). In theory, this propagation process produces a phage lysate that contains input phages and their evolved phage progeny. However, in practice, this phage lysate can also include prophages originating from bacterial hosts. Here we describe our experience implementing one directed evolution method, the Appelmans protocol, to study phage evolution in the Pseudomonas aeruginosa phage-host system, in which we observed rapid host-range expansion of the phage cocktail. Further experimentation and sequencing analysis revealed that this observed host-range expansion was due to a Casadabanvirus prophage that originated from one of the Appelmans hosts. Host-range analysis of the prophage showed that it could infect five of eight bacterial hosts initially used, allowing it to proliferate and persist through the end of the experiment. This prophage was represented in half of the sequenced phage samples isolated from the Appelmans experiment. This work highlights the impact of prophages in directed evolution experiments and the importance of incorporating sequencing data in analyses to verify output phages, particularly for those attempting to procure phages intended for phage therapy applications. This study also notes the usefulness of intraspecies antagonism assays between bacterial host strains to establish a baseline for inhibitory activity and determine presence of prophage. IMPORTANCEDirected evolution is a common strategy for evolving phages to expand host range, often targeting pathogenic strains of bacteria. In this study we investigated phage host-range expansion using directed evolution in the Pseudomonas aeruginosa system. We show that prophage are active players in directed evolution and can contribute to observation of host-range expansion. Since prophage are prevalent in bacterial hosts, particularly pathogenic strains of bacteria, and all directed evolution approaches involve iteratively propagating phage on one or more bacterial hosts, the presence of prophage in phage preparations is a factor that needs to be considered in experimental design and interpretation of results. These results highlight the importance of screening for prophages either genetically or through intraspecies antagonism assays during selection of bacterial strains and will contribute to improving experimental design of future directed evolution studies.

Auteurs: Tracey Lee Peters, J. Schow, J. T. Van Leuven, H. A. Wichman, C. R. Miller

Dernière mise à jour: 2024-06-29 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.28.601269

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.06.28.601269.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

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