Étudier la régénération chez *Parhyale hawaiensis*
La recherche se concentre sur comment certains animaux régénèrent des membres perdus.
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Table des matières
La Régénération, c'est le processus par lequel des animaux peuvent repousser des parties de leur corps perdues ou endommagées. Cette recherche se concentre sur la compréhension de comment certains animaux, comme le crustacé Parhyale hawaiensis, peuvent régénérer leurs pattes. Étudier ces processus aide les scientifiques à en apprendre plus sur la guérison, la croissance et le rôle des différentes cellules dans les organismes vivants.
Imagerie en direct de la régénération
Défis de l'Étudier la régénération chez des animaux vivants a ses difficultés. Un des gros défis, c'est que les créatures adultes, contrairement aux embryons qui peuvent être facilement immobilisés, ont tendance à bouger. Elles doivent se déplacer pour manger et respirer, ce qui rend difficile de les garder immobiles longtemps sous un microscope. Bien qu'on puisse utiliser l'anesthésie pour de courtes périodes, ça peut être dangereux si on le fait trop longtemps.
Un autre souci, c'est le temps que ça prend pour que la régénération se fasse. Chez des embryons où le développement est rapide, les chercheurs peuvent capturer des images et observer les changements en détail. Cependant, la régénération prend généralement des jours ou des semaines, et une exposition prolongée à la lumière peut être nuisible pour les tissus vivants. Une bonne imagerie nécessite aussi de bons appareils qui maintiennent la clarté et enregistrent des images sur le long terme.
La taille des animaux adultes complique aussi l'imagerie. Ils peuvent être trop gros pour tenir confortablement sous un microscope ou être hors de portée du microscope pour une bonne image.
Malgré ces défis, les scientifiques ont fait des progrès. Ils ont réussi à utiliser des techniques d'imagerie en direct sur des créatures comme les poissons zèbres et les souris pour observer le comportement des cellules pendant la guérison.
Le cas de Parhyale hawaiensis
Parhyale hawaiensis est devenu récemment un choix populaire pour étudier la régénération. Les chercheurs peuvent combiner de nouvelles techniques génétiques avec l'imagerie en direct. Un des principaux avantages, c'est qu'ils peuvent garder les pattes en régénération de ces animaux immobiles sans utiliser d'anesthésie. Ils les fixent sur une lame de verre avec de la colle chirurgicale. Cette méthode permet aux chercheurs de voir clairement la régénération sur plusieurs jours.
Dans une étude, les scientifiques ont utilisé cette approche pour capturer des images en continu sur deux à trois jours, en se concentrant sur des événements importants comme comment les blessures guérissent et comment les cellules se multiplient. Ils veulent comprendre tout le processus de régénération des pattes en détail, y compris comment les cellules individuelles bougent et changent avec le temps.
La régénération des pattes chez Parhyale prend environ une semaine, selon plusieurs facteurs. Les chercheurs ont constaté qu'imager toutes les 20 minutes suffît pour suivre comment les cellules se divisent et se comportent pendant la régénération.
Observer le processus de régénération
Chez Parhyale, la régénération se produit à l'extrémité de la patte amputée. En enlevant des parties spécifiques de la patte, les scientifiques peuvent observer tout ce qu'il se passe dans cette zone. Avec un type particulier de microscope, ils peuvent capturer tous les détails nécessaires avec une seule lentille.
Pendant l'imagerie, les chercheurs peuvent voir les différentes étapes de la régénération de la patte. Par exemple, juste après l'amputation, un type de cellule appelé Hémocytes se regroupe sur le site de la blessure. Au fil du temps, ces cellules créent une couche protectrice, et d'autres cellules viennent couvrir la plaie. Après un moment, le nouveau tissu de la patte commence à se former.
Ces observations aident à clarifier comment se passe la régénération des pattes. Par exemple, un jour après l'amputation, les chercheurs peuvent voir les couches de guérison se former et la croissance de nouvelles cellules commencer. Ils ont remarqué que certains patterns, comme la rapidité de croissance de la nouvelle patte, peuvent varier selon la santé ou l'âge du Parhyale utilisé dans les études.
Suivre le comportement cellulaire
En imager continuellement la régénération des pattes, les scientifiques peuvent observer de près comment les cellules individuelles se comportent pendant cette période. Ils utilisent des logiciels spécialisés pour aider à suivre les cellules pendant qu'elles se divisent et se déplacent. Ce logiciel permet aussi aux chercheurs de revenir en arrière et voir d'où venaient des cellules spécifiques au fil du temps.
Cependant, le suivi peut encore être difficile à cause des différences de lumière et de la qualité des images prises. Les chercheurs ont développé des méthodes pour gérer cela, en essayant différents réglages pour trouver un équilibre qui leur permette de voir clairement les cellules sans trop endommager les tissus.
Combiner l'imagerie avec des techniques de coloration
Alors que l'imagerie en direct aide à comprendre comment les cellules se déplacent, ça ne montre pas facilement quels types de cellules sont présents. Pour identifier différents types de cellules, les chercheurs ont développé une technique qui combine l'imagerie en direct avec des méthodes de coloration.
Après avoir enregistré le processus de régénération, les chercheurs peuvent fixer et colorer les pattes pour mettre en évidence des types cellulaires spécifiques. De cette façon, ils peuvent lier les cellules colorées à celles observées pendant l'imagerie en direct.
Dans un exemple, les chercheurs ont utilisé une méthode de coloration pour identifier des cellules qui sont probablement liées au système nerveux pendant la régénération. En faisant correspondre ces cellules colorées aux images en direct, ils ont pu suivre comment des types spécifiques de cellules contribuaient au processus de reconstruction.
Directions futures dans la recherche sur la régénération
L'utilisation de Parhyale pour étudier la régénération des membres offre une super opportunité pour les chercheurs de comprendre comment les cellules travaillent ensemble pour restaurer des parties du corps perdues. Il reste plusieurs défis à relever pour améliorer la clarté des images et identifier différents types de cellules.
Des améliorations dans les techniques d'imagerie pourraient aider les scientifiques à voir les cellules plus clairement, surtout dans les couches de tissu plus profondes. De nouveaux équipements ou des solutions qui réduisent les dommages causés par la lumière pourraient aider ces études.
Un autre domaine important à développer est celui des marqueurs fluorescents. Ces marqueurs permettraient aux scientifiques d'identifier facilement divers types de cellules pendant le processus de régénération. Bien que les chercheurs aient fait des progrès, le travail continue pour trouver des marqueurs efficaces qui peuvent être utilisés dans ce modèle animal unique.
Combiner l'imagerie en direct avec des techniques moléculaires renforcera la compréhension de comment les cellules se développent et changent pendant la régénération. Cette recherche non seulement nous enseigne sur Parhyale, mais pourrait aussi fournir des éclairages sur la régénération chez d'autres espèces, y compris les humains.
Grâce à une amélioration continue et à l'innovation dans les méthodes, les scientifiques visent à recueillir plus de connaissances sur la régénération et les comportements cellulaires, contribuant ainsi des informations précieuses au domaine de la biologie et de la médecine.
Titre: Long-term live imaging, cell identification and cell tracking in regenerating crustacean legs
Résumé: High resolution live imaging of regeneration presents unique challenges, due to the nature of the specimens (large mobile animals), the duration of the process (spanning days or weeks), and the fact that cellular resolution must be achieved without damage caused by lengthy exposures to light. Here, we develop a method for live imaging that captures the entire process of leg regeneration, spanning up to 10 days, at cellular resolution, in the crustacean Parhyale hawaiensis. Our method allows (1) mounting and long-term live imaging of regenerating legs under conditions that yield high spatial and temporal resolution but minimise photodamage, (2) fixing and in situ staining of the regenerated legs that were imaged, to identify cell fates, and (3) computer-assisted cell tracking to determine the cell lineages and progenitors of identified cells. The method is optimised to limit light exposure while maximising tracking efficiency. Combined with appropriate cell-type-specific markers, this method may allow the description of cell lineages for every regenerated cell type in the limb.
Auteurs: Michalis Averof, C. Cevrim, B. Laplace-Builhe, K. Sugawara, M. L. Rusciano, N. Labert, J. Brocard, A. Almazan
Dernière mise à jour: 2024-09-12 00:00:00
Langue: English
Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.11.612529
Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.09.11.612529.full.pdf
Licence: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.
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Liens de référence
- https://github.com/mastodon-sc/mastodon
- https://github.com/elephant-track
- https://github.com/elephant-track/align-slices3d
- https://github.com/elephant-track/elephant-client/blob/main/src/main/java/org/elephant/actions/BackTrackAction.java
- https://github.com/ksugar/czi_sampling/blob/main/src/czi_sampling/sampling.py
- https://github.com/mastodon-sc/mastodon-averoflab
- https://github.com/elephant-track/elephant-server/blob/trackathon-paper/script/train_trackathon.sh
- https://github.com/elephant-track/elephant-server/blob/trackathon-paper/script/train_trackathon_flow.sh
- https://github.com/ksugar/n2v/blob/czi/examples/3D/03_training_20220927.ipynb
- https://github.com/ksugar/n2v/blob/czi/examples/3D/04_prediction_20220927.ipynb
- https://zenodo.org/records/13709859