Simple Science

La science de pointe expliquée simplement

# Biologie # Biophysique

OPM : L'avenir de la microscopie

Une technique d'imagerie révolutionnaire révèle des détails cellulaires sans les endommager.

Trung Duc Nguyen, Amir Rahmani, Aleks Ponjavic, Alfred Millett-Sikking, Reto Fiolka

― 7 min lire


La prochaine étape de la La prochaine étape de la microscopie l'imagerie cellulaire. Une nouvelle technique OPM révolutionne
Table des matières

Quand il s'agit d'imager de toutes petites structures à l'intérieur des cellules vivantes, les chercheurs se retrouvent souvent dans une situation délicate. Ils ont besoin de voir ce qui se passe sans trop abîmer. C'est là qu'entre en jeu la Microscopie en plan oblique (MPO) - pense à ça comme le super-héros des microscopes. C'est rapide, doux, et parfait pour observer les petites choses en action dans le temps. La MPO est une variante d'une technique appelée microscopie à fluorescente en feuille de lumière (MFL), qui a récemment fait sensation dans le monde de la science.

Comment ça marche

La MPO utilise un système malin pour projeter une feuille de lumière à un angle sur l'échantillon étudié. Cette lumière angulaire aide à créer des images de haute qualité tout en minimisant les dommages. Elle utilise un seul objectif qui lance la lumière et capte la fluorescence de l'échantillon. Ça veut dire que si l'objectif dérive - comme quand ton œil glisse hors de l'écran pendant un film - la feuille de lumière et la détection restent parfaitement synchronisées. Ce petit truc fait que la MPO fonctionne mieux dans des situations difficiles où les choses peuvent devenir un peu instables.

Le problème du drift

Dans n'importe quel système d'imagerie, le drift fait référence au mouvement indésirable de l'objectif ou de l'échantillon pendant une expérience. Imagine essayer de prendre une photo pendant que ton appareil photo bouge tout le temps - super frustrant, non ? Le drift peut causer des images floues et rendre difficile la mise au point sur ce qui compte. C'est particulièrement problématique en MFL, où des objectifs séparés pour la lumière et la détection peuvent facilement se désaligner.

Stabilisation de mise au point à distance

Revenons à notre super-héros, la MPO. Elle a une arme secrète dans son arsenal : un système de stabilisation de mise au point à distance. Cette fonctionnalité astucieuse aide à garder les images nettes et claires sans avoir besoin d'interrompre le processus d'imagerie. Les systèmes MFL classiques doivent généralement s'arrêter et mesurer leur alignement, ce qui peut faire perdre un temps précieux et de la fluorescence. La stabilisation de mise au point à distance de la MPO fonctionne en continu en arrière-plan, permettant aux chercheurs de se concentrer sur ce qu'ils étudient vraiment - comme ces petites Nanosphères mignonnes ou les cellules cancéreuses.

Le montage optique

Imagine mettre en place une machine délicate pour tirer le meilleur parti de tes échantillons précieux. Dans notre MPO, la lumière laser est dirigée à travers un système de miroirs sophistiqué qui aide à créer cette feuille de lumière oblique. Après être passée à travers quelques lentilles et miroirs, la lumière est pointée dans l'espace de l'échantillon, permettant de capturer des détails fins. Le laser aide aussi à stabiliser la mise au point, agissant comme une lumière guide pour garder tout sur la bonne voie.

La magie de la caméra

À la fin du parcours optique, la fluorescence émise par l'échantillon est capturée par une caméra. Cette caméra n'est pas un gadget ordinaire ; elle est spécialement conçue pour minimiser le flou et s'assurer que les plus fins détails ressortent. L'agencement intelligent des lentilles facilite le maintien de tout en alignement, ce qui donne de meilleures images.

Garder un œil sur l'alignement

Le faisceau laser d'alignement est un composant essentiel du système de stabilisation. Il est injecté dans le chemin optique et dirigé hors centre pour assurer une haute sensibilité. Si quelque chose dérive, le système peut rapidement détecter le changement et s'ajuster en conséquence. Pense à ça comme avoir un pote qui garde toujours un œil attentif sur ton alignement pendant que tu te concentres sur le principal.

Le système de contrôle de rétroaction

Là, on va devenir un peu technique - mais pas trop. Le système de contrôle de rétroaction est comme le cerveau de l'opération. Il vérifie en continu si le point laser est au bon endroit en prenant des images rapides. Si le point laser s'égare, le système le corrige rapidement en ajustant la position de l'objectif tertiaire. C'est un peu comme un chien très intelligent qui sait comment chercher tes chaussons mais qui est aussi génial pour garder ton imagerie sous contrôle.

Précision et stabilité à long terme

L'exactitude de ce système est impressionnante. Imagine prendre une série de photos rapides pendant 100 secondes. Les données collectées montrent un écart-type d'environ 57 nanomètres. Dans le monde de la microscopie, c'est comme toucher le centre du cible à chaque fois. Après tout, qui ne voudrait pas d'une précision de l'ordre de 100 nanomètres ? Et si tu te demandais, c'est bien plus précis que le livreur de pizza moyen qui arrive en retard.

Tests d'imagerie avec des nanosphères et des cellules cancéreuses

Pour voir si tout fonctionnait comme prévu, les chercheurs ont décidé de faire quelques tests. Ils ont commencé avec des nanosphères fluorescentes, qui sont comme de petites boules lumineuses, et les ont imaginées pendant une heure. Au départ, tout était aligné et les images étaient magnifiques. Mais vers la fin de l'heure, les choses ont commencé à se dégrader. L'alignement était décalé et les images sont devenues floues, donnant l'impression que quelqu'un avait étalé de la Vaseline sur l'objectif de la caméra.

Ensuite, c'était la grosse affaire : des cellules cancéreuses A375. Les chercheurs ont imaginé ces cellules avec le système de stabilisation activé, et voilà ! Les résultats étaient d'une clarté cristalline, avec des détails fins visibles tout au long de l'intervalle de temps. La feuille de lumière est restée parfaitement alignée, ce qui a permis de capturer ces structures cellulaires complexes. C'était comme regarder une performance de danse bien répétée, où chaque mouvement était exécuté parfaitement.

Améliorations futures

Même les super-héros peuvent bénéficier d'une petite amélioration. Bien que ce système MPO soit déjà impressionnant, il y a des idées sur comment le rendre encore meilleur. Par exemple, les ingénieurs pourraient peaufiner le point laser pour rendre les ajustements de mise au point plus précis. Cela pourrait réduire le drift et améliorer les performances globales, surtout pour des tâches d'imagerie plus complexes.

Conclusion

En s'achevant sur notre voyage à travers la MPO, il est clair que cette technologie ouvre de nouvelles portes pour les chercheurs. La capacité d'imager des cellules vivantes sur de longues périodes sans perdre en qualité est un pas en avant significatif. Ce super-héros des méthodes d'imagerie ne livre pas seulement des résultats époustouflants mais pave aussi la voie pour de futures découvertes dans divers domaines. Alors, que tu étudies les plus petites cellules ou que tu cherches à percer les secrets du cancer, la MPO est là pour t'aider - pas besoin de cape !

Source originale

Titre: Active Remote Focus Stabilization in Oblique Plane Microscopy

Résumé: Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM) has demonstrated great potential in the life sciences owing to its efficient volumetric imaging capabilities. For long term imaging, the light-sheet typically needs to be stabilized to the detection focal plane for the best imaging results. Current light-sheet stabilization methods rely on fluorescence emission from the sample, which may interrupt the scientific imaging and add to sample photobleaching. Here we show that for oblique plane microscopes (OPM), a subset of LSFM where a single primary objective is used for illumination and detection, light-sheet stabilization can be achieved without expending sample fluorescence. Our method achieves ~43nm axial precision and maintains the light-sheet well within the depth of focus of the detection system for hour-long acquisition runs in a lab environment that would otherwise detune the system. We demonstrate subcellular imaging of the actin skeleton in melanoma cancer cells with a stabilized OPM.

Auteurs: Trung Duc Nguyen, Amir Rahmani, Aleks Ponjavic, Alfred Millett-Sikking, Reto Fiolka

Dernière mise à jour: 2024-12-02 00:00:00

Langue: English

Source URL: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.29.626121

Source PDF: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.11.29.626121.full.pdf

Licence: https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/

Changements: Ce résumé a été créé avec l'aide de l'IA et peut contenir des inexactitudes. Pour obtenir des informations précises, veuillez vous référer aux documents sources originaux dont les liens figurent ici.

Merci à biorxiv pour l'utilisation de son interopérabilité en libre accès.

Plus d'auteurs

Articles similaires

Physique des hautes énergies - Phénoménologie Collisions de particules à haute énergie : Une enquête colorée

Des chercheurs étudient les interactions complexes en physique des particules et leurs implications pour les collisions d'énergie.

Anjie Gao, Ian Moult, Sanjay Raman

― 10 min lire